部分食品單核細胞增生性李斯特菌污染檢測及其PFGE分型.pdf

1、目的：1.參加英國食品檢驗能力評價體系（FEPAS）活動，促進本實驗室的管理水平和技術能力與國際接軌。2.檢測部分食品中單核細胞增生性李斯特菌的污染狀況。3.采用PFGE分型方法為建立貴州單核細胞增生性李斯特菌PFGE數據庫提供依據。
　　方法：1.參照 GB22429-2008《食品中沙門氏菌、腸出血性大腸埃希氏菌 O157及單核細胞增生李斯特氏菌的快速篩選檢驗》、SN/T1870-2007《食品中致病菌檢測方法實時PCR法》、

2、AOAC Official Method993.09.2000《李斯特屬在乳制品，海產品和肉類中的DNA雜交探針檢測法》、GB4789.30-2010《食品衛(wèi)生微生物學檢驗單核細胞增生李斯特氏菌檢驗》分別對FEPAS能力驗證提供的二份盲樣(M164d02A和M164d02B)運用酶聯免疫熒光法、實時熒光定量PCR法、基因探針法和常規(guī)方法同時進行檢測。2.食品單核細胞增生性李斯特菌污染調查分析的樣品采集參照GB4789.1-2010《食品

3、微生物學檢驗總則》進行，從我國部分省會城市（長沙市、貴陽市、成都市和重慶市）各選擇兩個抽樣點，采集樣本175份。另加貴州省出口辣椒制品120份，總計295份食品。其中辣椒制品229份、肉及肉制品37份、餐飲食品20份、動物性水產品6份、速凍食品3份。參照GB22429-2008對抽檢樣本行快速篩選，單核細胞增生性李斯特菌檢測結果為陽性時，參照GB4789.30-2010進行單增李斯特菌分離鑒定確認，可疑菌株用API Listeria生化

4、鑒定試劑盒及VITEK2 compact30全自動細菌鑒定分析系統(tǒng)進行鑒定，綜合溶血試驗的結果最終鑒定。3.對3株從食品中檢出的單核細胞增生性李斯特菌(M164d02A、201105012、201106017)及3株單核細胞增生性李斯特菌（2010GZYJSZS、201109066、 ATCC-BAA-751）參照 PulseNet推薦方法對其進行PFGE分型。
　　結果：1.在單核細胞增生性李斯特菌PEPAS能力驗證中四種檢測方

5、法結果一致，樣本 M164d02A檢出單核細胞增生性李斯特菌，樣本 M164d02B未檢出單核細胞增生性李斯特菌并獲得FEPAS能力驗證“Excellent identification”結果。2.在295份食品中，229份辣椒制品、37份肉及肉制品、20份餐飲食品均未檢出單核細胞增生性李斯特菌，而在6份動物性水產品中檢出1株單核細胞增生性李斯特菌,在3份速凍食品食品中檢出1株單核細胞增生性李斯特菌。3.應用PFGE方法對6株單核細胞增

6、生性李斯特菌進行分子PFGE分型，用Quantity one軟件對圖譜進行相似度分析，根據電泳產生條帶的位置和數量的不同，共分為6個不同的型別，相似值在6.8％-73％。
　　結論：1.4種FEPAS能力驗證的檢測方法均有效檢出單核細胞增生性李斯特菌，說明每一種方法都可有效獲得 FEPAS能力驗證。2.實驗結果表明動物性水產品和速凍食品存在單核細胞增生性李斯特菌污染的風險。3.對6株單核細胞增生性李斯特菌應用PFGE方法進行PFG