中國(guó)漢族人瘢痕疙瘩易感基因相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景:瘢痕疙瘩是一種超常增生的致密的纖維組織,通常在皮膚損傷愈合后發(fā)生,而且僅發(fā)生在人類身上。瘢痕疙瘩由過多的細(xì)胞外基質(zhì)的累積特別是膠原蛋白的大量形成造成的,它超出了原來傷口的范圍,侵犯到周圍正常的皮膚組織中,造成患者外觀和功能上的不適,更甚于導(dǎo)致心理和生理的疾病。瘢痕疙瘩通常是散發(fā)的,盡管它影響了所有的種族,但是在非裔和亞裔等有色人種中顯示了較高的發(fā)病率。黑種人比白種人患此種疾病的風(fēng)險(xiǎn)高出近15倍。瘢痕疙瘩的病因目前還沒有確定。遺

2、傳因素被認(rèn)為是導(dǎo)致瘢痕疙瘩發(fā)病的重要原因,瘢痕體質(zhì)者具有一定的家族遺傳傾向。到目前為止,瘢痕疙瘩的遺傳方式尚無定論。因此明確其遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)制,確定該病的易感基因無論對(duì)基礎(chǔ)理論研究還是疾病治療都具有非常積極的指導(dǎo)意義。國(guó)外學(xué)者通過對(duì)不同的瘢痕疙瘩家系調(diào)查分別得出該病為常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳等不同的遺傳模式,大部分學(xué)者趨向于認(rèn)為瘢痕疙瘩為常染色體顯性遺傳,但并非簡(jiǎn)單的孟德爾式單基因遺傳,還有學(xué)者認(rèn)為該病基本符合常染色體顯性遺傳伴

3、臨床不完全外顯及可變的表現(xiàn)度。
　　近年來,有關(guān)瘢痕疙瘩的遺傳學(xué)研究多集中在瘢痕疙瘩相關(guān)基因的表達(dá)水平上,其中較多的集中在瘢痕疙瘩與P53基因、FAS基因、c-myc、c-fos、ras基因、Bcl-2家族、ICE家族等各種凋亡基因以及瘢痕疙瘩與HLA及細(xì)胞因子TGF–β、IL、TGF–β/Smad信號(hào)通路等相關(guān)性研究,但也只是停留在探索性研究階段,迄今為止尚未有統(tǒng)一的定論。
　　人類基因組計(jì)劃(HGP)和國(guó)際單體型圖計(jì)劃(

4、HapMap)的完成,為復(fù)雜疾病的易感基因研究提供了重要的生物信息和分析工具。高通量基因分型技術(shù)的迅速發(fā)展和分型成本的不斷降低,使得復(fù)雜疾病易感基因的全基因組關(guān)聯(lián)分析(genome-wideassociationstudy,GWAS)研究成為可能。GWAS就是利用關(guān)聯(lián)分析原理,通過比較病例和對(duì)照等位基因頻率之間的差異,從全基因組范圍內(nèi)的遺傳變異中,篩選出與疾病性狀關(guān)聯(lián)的單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphi

5、sm,SNPs),再根據(jù)其在基因組中的位置和連鎖不平衡推測(cè)可能的疾病易感基因,并對(duì)這些基因和疾病的關(guān)系進(jìn)行驗(yàn)證及相關(guān)功能研究。GWAS被認(rèn)為是目前科學(xué)界公認(rèn)的最為有效的搜尋重大疾病易感基因的研究方法之一,被《科學(xué)》雜志(Science)評(píng)選為2007年世界十大科學(xué)進(jìn)展之首。到目前為止,國(guó)際上只有一篇在日本人群進(jìn)行瘢痕疙瘩GWAS研究的文章在2010年NatureGenetics雜志(影響因子:30.259)發(fā)表,發(fā)現(xiàn)了四個(gè)與瘢痕疙瘩易感

6、性顯著相關(guān)聯(lián)的SNPs變化:rs873549、rs940187、rs1511412和rs8032158,其中rs8032158位于染色體15q21.3上的NEDD4基因上。由于瘢痕疙瘩的發(fā)病存在顯著的種族及種群差異性,為了驗(yàn)證中國(guó)人群瘢痕疙瘩易感基因位點(diǎn)是否也分布在上述染色體區(qū)域,本研究在中國(guó)漢族人群中應(yīng)用GWAS方法對(duì)瘢痕疙瘩的易感基因位點(diǎn)進(jìn)行基因分型及驗(yàn)證研究,以期發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩的易感基因,為進(jìn)一步闡明瘢痕疙瘩的發(fā)病機(jī)制及臨床防治奠定

7、基礎(chǔ)。
　　目的:1.依據(jù)亞洲人群(日本人)瘢痕疙瘩全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)結(jié)果并結(jié)合加勒比海非裔人等瘢痕疙瘩易感基因SNPs數(shù)據(jù)選取有意義的12個(gè)SNPs,在714例中國(guó)瘢痕疙瘩病例和2944例正常對(duì)照中驗(yàn)證并尋找中國(guó)漢族人瘢痕疙瘩易感基因和位點(diǎn)。
　　2.研究候選易感基因NEDD4-1在瘢痕疙瘩組織中的表達(dá)。
　　方法:1.利用SequenomMassarray系統(tǒng),選擇最有意義的12個(gè)SNPs位點(diǎn)在中國(guó)漢族人

8、群中進(jìn)行瘢痕疙瘩候選易感基因關(guān)聯(lián)研究驗(yàn)證(714例瘢痕疙瘩病例和2944例正常對(duì)照),使用以性別和樣本組作為共變量的Logistic回歸進(jìn)行樣本的聯(lián)合分析。
　　2.運(yùn)用RT-PCR和WesternBlot方法,從mRNA和蛋白水平,對(duì)中國(guó)漢族瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、正常皮膚組織中NEDD4-1基因的表達(dá)水平進(jìn)行比較研究。
　　結(jié)果:1.位于15q21.3區(qū)域SNP位點(diǎn)(rs2271289)在驗(yàn)證人群中顯示有意義(P<0.05

9、),并與瘢痕疙瘩高度關(guān)聯(lián)(rs2271289:OR=0.6564,P=1.02E-11)。rs2271289位于NEDD4基因上。
　　2.位于1q41區(qū)域SNP位點(diǎn)(rs873549和rs1442440)在驗(yàn)證人群中顯示有意義(P<0.05),并與瘢痕疙瘩高度關(guān)聯(lián)(rs873549:OR=2.05,95％CI:1.819-2.305,P=3.03E-33,Pcombined=9.09E-33;rs1442440:OR=0.56,

10、95%CI:0.49-0.64,P=9.58E-18,Pcombined=2.87E-17)。
　　3.NEDD4-1基因在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮膚中的表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:1.三個(gè)易感位點(diǎn)在中國(guó)漢族人群中都被驗(yàn)證出來。研究結(jié)果為中國(guó)漢族瘢痕疙瘩遺傳基礎(chǔ)提出了新的見解,另外揭示中國(guó)漢族瘢痕疙瘩患者和日本患者之間不僅存在共同的遺傳發(fā)病機(jī)理,還存在遺傳異質(zhì)性。對(duì)于1q41區(qū)域易感位點(diǎn)及NEDD4基因繼