MMP-12、TIMP-1、Elastin在女性壓力性尿失禁患者陰道壁組織中的表達(dá).pdf

1、尿失禁是婦女的一個(gè)常見(jiàn)癥狀，它包括多種類(lèi)型，如真性尿失禁、功能性尿失禁、壓力性尿失禁、急迫性尿失禁等。在這些疾病中，以壓力性尿失禁( stress urinary incontinence， SUI)最常見(jiàn)，其發(fā)病率約占尿失禁總發(fā)病率的50％-70％。
　　 目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于SUI的定義如下：當(dāng)增加腹壓甚至在休息時(shí)，膀胱頸和尿道不能維持正常的壓力，而有尿液不自主溢出的現(xiàn)象。SUI嚴(yán)重影響婦女的生活質(zhì)量，隨著世界人口老齡化程度的加

2、重，SUI越來(lái)越多的受到廣大學(xué)者的重視，為從根本上防范SUI的發(fā)生，學(xué)者對(duì)其病因進(jìn)行了廣泛的研究，但是目前尚未得到一致結(jié)論。
　　 盆底支持組織的衰弱與SUI的發(fā)生密切相關(guān)。彈性蛋白(Elastin)、膠原蛋白、層粘連蛋白等是盆底支持組織細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular martrix， ECM)的主要成分。有研究發(fā)現(xiàn)，膠原蛋白的含量、結(jié)構(gòu)、功能、Ⅰ/Ⅲ型膠原相應(yīng)比例異常與SUI的關(guān)系密切。另有研究證實(shí)，盆內(nèi)筋膜代謝活躍，

3、膠原的分解增加可能參與SUI形成。而彈性蛋白也是盆底支持組織中的一個(gè)主要成分，它能使所在組織具有伸縮性和可逆的變形能力，對(duì)于維持盆底組織功能的維持也有重大意義，目前Elastin在盆底器官脫垂(pelvic organ prolapse，POP)成因方面有所涉及，但是在SUI的發(fā)病原因方面國(guó)內(nèi)外尚未有研究。
　　 基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)是調(diào)節(jié)ECM代謝的重要酶類(lèi)，在盆底支持組

4、織合成及分解代謝方面起著直接或間接的作用。MMPs是一組含Zn2+的蛋白酶家族，它能夠降解ECM和基底膜，包括以下五大類(lèi)：(1)膠原酶(MMP-1，MMP-8)；(2)膜型蛋白酶（MTl-MMP、MT2-MMP等）；(3)明膠酶(MMP-2和MMP-9):(4)基質(zhì)溶解素(MMP-3，MMP-7，MMP-10)；(5)彈性蛋白酶(MMP-12)。其中MMP-12的主要作用底物是彈性纖維、層粘連蛋白、纖粘連蛋白等。已有大量研究表明MMP-

5、12在食管癌、上皮性卵巢癌、肺癌及結(jié)腸癌等疾病中均呈高表達(dá)，因人類(lèi)女性陰道壁組織中含有彈性纖維，推測(cè)MMP-12與女性SUI的發(fā)病機(jī)制也有關(guān)聯(lián)。
　　 基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑( tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMPs)是一個(gè)多基因家族的編碼蛋白對(duì)MMPs有負(fù)調(diào)節(jié)作用。TIMP-1是MMP-12的特異性抑制劑，在生理狀態(tài)下，二者保持平衡，使體內(nèi)Elastin的破壞與重建維持在正常水

6、平。而當(dāng)這種平衡狀態(tài)被打破時(shí)，會(huì)引發(fā)體內(nèi)一系列的病理情況。因此推測(cè)體內(nèi)MMPs與TIMPs調(diào)節(jié)失衡也是SUI發(fā)病的原因之一。
　　 目的：
　　 本課題取人陰道前壁組織為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組對(duì)象陰道壁組織中MMP-12、TIMP-1、Elastin的含量，并對(duì)三指標(biāo)之間的相關(guān)性進(jìn)行分析，同時(shí)用RT-PCR法檢測(cè)各組中Elastin mRNA的含量。了解MMP-12、TIMP-1、Elastin的表達(dá)與

7、女性SUI之間的關(guān)系，以期今后能夠從病因上為SUI的治療提供依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 1材料
　　 選取2009年8月到2010年2月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦科住院治療的SUI患者(SUI組)30例，年齡在37-60歲之間，平均55.30±5.87歲；POP患者(POP組)30例，年齡在40-59歲之間，平均53.31±5.93歲；并選擇非卵巢功能性腫瘤及宮頸上皮內(nèi)瘤變患者30例作為對(duì)照組，在38-65歲

8、之間，平均55.43±4.48歲。
　　 選取標(biāo)準(zhǔn)：SUI組：有尿失禁癥狀，根據(jù)婦科檢查、各項(xiàng)輔助檢查如尿動(dòng)力學(xué)檢查和尿墊試驗(yàn)等確診為SUI，并排除不穩(wěn)定膀胱、充盈性尿失禁及尿路感染等情況；POP組：患者自述無(wú)SUI癥狀，婦科檢查有中度及以上陰道前壁膨出，輔助檢查均證實(shí)無(wú)尿失禁；對(duì)照組：無(wú)尿失禁癥狀，婦科檢查無(wú)盆底器官膨出，術(shù)后病理檢查證實(shí)為非雌激素相關(guān)性疾病。
　　 取材部位：均選取陰道前壁上段12點(diǎn)處組織，大小約0.

9、5cm×0.5cm×0.5cm。SUI組采用TVT-O、TVT-S手術(shù)或者陰道前壁修補(bǔ)術(shù)，POP組患者采用前盆底懸吊術(shù)、陰道前壁修補(bǔ)術(shù)，對(duì)照組采用子宮全切術(shù)（陰式或腹式）。經(jīng)樣本均衡性測(cè)定，三組病人在產(chǎn)次、年齡、體重指數(shù)等方面差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)，具有可比性?；颊咝g(shù)前均簽署知情同意書(shū)。
　　 2方法
　　 采用免疫組化S-P法，操作步驟遵循于試劑盒說(shuō)明書(shū)，檢測(cè)三組患者陰道壁組織中MMP-12、TIMP-1、El

10、astin的表達(dá)情況，并同時(shí)使用RT-PCR方法檢測(cè)三組患者陰道壁組織中的Elastin RNA的含量，從分子水平研究Elastin的表達(dá)情況。
　　 3結(jié)果判定和圖像分析
　　 3.1免疫組化法
　　 于顯微鏡下觀察，陰道壁粘膜下結(jié)締組織中各指標(biāo)所表達(dá)部位呈現(xiàn)淡黃色至棕黃色顆粒沉著為陽(yáng)性表達(dá)，MMP-12及TIMP-1主要定位在胞漿，Elastin主要定位于間質(zhì)。全面觀察每張切片中各指標(biāo)的表達(dá)情況，從中隨機(jī)選取

11、5個(gè)有代表性的高倍視野（40×10倍），電子計(jì)算機(jī)圖像分析儀計(jì)算分析各免疫組化染色陽(yáng)性區(qū)的平均灰度值。染色強(qiáng)弱與平均灰度值之間成正比。
　　 3.2 RT-PCR法
　　 電泳后，照相記錄，以?xún)?nèi)參基因β-actin為基準(zhǔn)分析各條帶的平均灰度值
　　 4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 應(yīng)用Excel2003錄入數(shù)據(jù)，各組數(shù)據(jù)的灰度值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，用SPSS16.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用單因素方差分析比

12、較三組間數(shù)據(jù)資料，用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較，Pearson相關(guān)性分析比較各指標(biāo)間的相關(guān)性。各種檢驗(yàn)方法均以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.1各組患者陰道壁組織中MMP-12的表達(dá)
　　 MMP-12在3組陰道壁粘膜下結(jié)締組織胞漿中都有表達(dá)，在SUI組與POP組的表達(dá)均比對(duì)照組強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而在SUI組與POP組之間的表達(dá)強(qiáng)度未見(jiàn)明顯差別，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.

13、05）。
　　 1.2各組患者陰道壁組織中TIMP-1的表達(dá)
　　 TIMP-1在3組陰道壁粘膜下結(jié)締組織胞漿中都有表達(dá)，在SUI組與POP組的表達(dá)均比對(duì)照組弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而在SUI組與POP組之間的表達(dá)強(qiáng)度未見(jiàn)明顯差別，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 1.3各組患者陰道壁組織中Elastin的表達(dá)
　　 Elastin在3組陰道壁粘膜下結(jié)締組織間質(zhì)中都有表達(dá)，在SUI組

14、與POP組的表達(dá)均比對(duì)照組弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而在SUI組與POP組之間的表達(dá)強(qiáng)度未見(jiàn)明顯差別，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 1.4 SUI組中MMP-12、TIMP-1、Elastin的相關(guān)性分析
　　 對(duì)SUI組陰道壁組織中三指標(biāo)表達(dá)的平均灰度值進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示：MMP-12與TIMP-1之間呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.999，P＜0.05)，MMP-12與Elastin之間呈顯著負(fù)

15、相關(guān)(r=-0.614，P＜0.05)，TIMP-1與Elastin的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.628，P＜0.05)。
　　 2 RT-PCR法
　　 計(jì)算3組陰道壁粘膜中Elastin mRNA表達(dá)，在SUI組與POP組的表達(dá)均比對(duì)照組弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而在SUI組與POP組之間的表達(dá)強(qiáng)度未見(jiàn)明顯差別，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 MMP-12、TIMP-