TGF-β1、Smad3和CTGF在女性壓力性尿失禁患者陰道壁組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、壓力性尿失禁(Stress Urinary Incontinence，SUI)被認(rèn)為是尿道對(duì)控尿起“開(kāi)關(guān)-閥門(mén)”失控引起的功能障礙性疾病，多數(shù)患者由于分娩、創(chuàng)傷等引起肛提肌損傷、盆底筋膜和韌帶松弛、泌尿道解剖位置改變所致。SUI是一種多因素參與的復(fù)雜性疾病，往往伴隨女性盆腔器官脫垂(pelvic organ prolapse，POP)。其特點(diǎn)是平時(shí)無(wú)漏尿，如咳嗽、大笑、重體力勞動(dòng)等腹壓增加時(shí)，尿液不自主地自尿道流出，且癥狀嚴(yán)重程度隨年齡

2、的增長(zhǎng)而加重，在美國(guó)60歲及以上38％婦女及17％男性均患有尿失禁。因此，國(guó)際控尿協(xié)會(huì)將SUI定義為腹壓突然增加時(shí)導(dǎo)致尿液失控不自主流出，其病因非逼尿肌收縮壓引起而是盆底解剖結(jié)構(gòu)出現(xiàn)異常或缺損致壓力傳導(dǎo)不均。有人將該病形象的稱為“社交癌”。雖然壓力性尿失禁不像心血管、腫瘤等疾病嚴(yán)重危及患者的生命健康，卻也引起了社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和衛(wèi)生等不同程度的影響;其嚴(yán)重程度越來(lái)越受到廣大婦女的關(guān)注。隨著“吊床假說(shuō)”和“盆底整體理論”的提出，人們逐漸意識(shí)到僅

3、單純檢測(cè)尿道壓、尿道長(zhǎng)度及膀胱尿道角等解剖改變的傳統(tǒng)方法已經(jīng)無(wú)法全面合理解釋SUI的發(fā)病機(jī)制，這就促使研究人員從分子生物學(xué)水平深入研究盆底支持組織的解剖結(jié)構(gòu)及功能。眾多研究表明，女性SUI患者盆底支持結(jié)構(gòu)中膠原及彈性蛋白含量顯著減少，引起支持組織彈性減弱，出現(xiàn)盆底松弛。而轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)作為最重要的細(xì)胞因子，既與膠原和彈性蛋白的合成及降解直接相關(guān)，又可改變基質(zhì)降解酶及其抑制因子的量及活性，在分娩、手術(shù)等造成盆底支持組織

4、損傷修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)可刺激成纖維細(xì)胞增殖和分泌膠原，在纖維化性疾病、創(chuàng)傷后瘢痕形成等方面有較多的研究，然而在盆底障礙性疾病的研究國(guó)內(nèi)外少有報(bào)道。而Smad3蛋白是細(xì)胞內(nèi)TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，對(duì)細(xì)胞功能起著雙向調(diào)控作用，參與控制創(chuàng)面組織的愈合。
　　目的：
　　本研究通過(guò)采用免疫組化和聚合酶-逆轉(zhuǎn)錄(RT-PCR)方法檢測(cè)TGF-β1、CTGF及Smad3三者在女性SUI患者陰道壁組織中

5、的表達(dá)，分析三者之間的相關(guān)性，探討他們?cè)赟UI發(fā)生機(jī)制中的作用，期望為該病的預(yù)防、治療提供理論依據(jù)。
　　材料和方法：
　　1.材料
　　選取2012年6月-2013年4月在本院婦產(chǎn)科收治的的60例中、重度壓力性尿失禁患者為實(shí)驗(yàn)組，包括25例單純性SUI，35例SUI合并POP，手術(shù)方式為經(jīng)陰道無(wú)張力尿道中段懸吊術(shù)(trans-obturatorvaginaltape，TVT-O)、陰道前后壁修補(bǔ)術(shù)，陰道前壁懸吊術(shù)。同

6、期選取20例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者均不伴SUI為對(duì)照組，手術(shù)方式為腹式或陰式子宮切除術(shù)。3組在年齡、產(chǎn)次及體重指數(shù)等方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有較好的可比性。所有病例均無(wú)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、甲狀旁腺功能亢進(jìn)、肺氣腫和肝纖維化等影響膠原代謝的疾病，術(shù)前3個(gè)月內(nèi)未曾使用過(guò)性激素類(lèi)藥物，未患功能性卵巢腫瘤，無(wú)泌尿生殖道感染，無(wú)既往盆底手術(shù)史。SUI診斷依據(jù)為患者的病史、婦科檢查、壓力試驗(yàn)、指壓試驗(yàn)、尿墊實(shí)驗(yàn)及尿動(dòng)力學(xué)檢查結(jié)果。SUI合并

7、POP診斷依據(jù)是除具有壓力性尿失禁的診斷標(biāo)準(zhǔn)外，婦科檢查均發(fā)現(xiàn)合并有POP-Q分類(lèi)法Ⅱ度及以上的陰道前壁膨出。實(shí)驗(yàn)組于陰道前壁12點(diǎn)或膀胱宮頸韌帶周?chē)蓧K陰道前壁組織各約0.8cm×0.5cm×0.2cm大小。對(duì)照組取自子宮切除后陰道殘端陰道壁組織。
　　2.實(shí)驗(yàn)方法
　　采用免疫組化(SP)法檢測(cè)SUI組、SUI+POP組和對(duì)照組患者陰道前壁組織中TGF-β1、CTGF和Smad3蛋白的表達(dá)情況。采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒?/p>

8、應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)三組TGF-β1、CTGF和Smad3mRNA水平。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)處理。多組定性資料的比較采用獨(dú)立的多組二分類(lèi)，兩兩比較采用四格表卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α/3=0.0167;多組定量資料的比較采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t法。兩連續(xù)變量相關(guān)分析采用Pearson積矩相關(guān)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.免疫組化染色結(jié)果<

9、br>　　SUI組、SUI+POP組和對(duì)照組3組患者陰道壁組織中均可見(jiàn)TGF-β1蛋白、CTGF蛋白和Smad3蛋白的表達(dá)。TGF-β1和CTGF蛋白主要表達(dá)于胞漿，呈現(xiàn)淡黃色至棕黃褐色的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞;Smad3蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核，呈現(xiàn)淡黃色至棕黃褐色顆粒的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞。
　　1)TGF-β1蛋白在3組陰道壁中陽(yáng)性表達(dá)率分別為28％、17.14％、95％，3組之間差異有顯著性(x2=34.327，P＜0.01);SUI組和S

10、UI+POP組比較，差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。
　　2)CTGF蛋白在3組陰道壁中陽(yáng)性表達(dá)率分別為16％、20％、95％，3組之間差異有顯著性(x2=37.717，P＜0.01);SUI組和SUI+POP組比較，差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。
　　3)Smad3蛋白在3組陰道壁中陽(yáng)性表達(dá)率分別為24％、14.29％、90％，3組之間差異有顯著性(x2=33.933，P＜0.01);SUI組和SUI+POP組比較，差異無(wú)顯

11、著性(P＞0.05)。
　　2.RT-PCR結(jié)果
　　半定量測(cè)定結(jié)果顯示:TGF-β1mRNA、CTGFmRNA及Smad3mRNA在3組中均為陽(yáng)性表達(dá)。
　　1)TGF-β1mRNA在SUI組、SUI+POP組和對(duì)照組陰道壁組織中表達(dá)量分別為（0.294±0.013）、（0.293+0.019）和（0.610±0.052），SUI組、SUI+POP組與對(duì)照組比較差異均有顯著性(P＜0.01);而SUI組與SUI+PO

12、P組比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。
　　2)CTGFmRNA在SUI組、SUI+POP組和對(duì)照組陰道壁組織中表達(dá)量分別為（0.085+0.012）、（0.092±0.011）和（0.272±0.029），SUI組、SUI+POP組與對(duì)照組比較差異均有顯著性(P＜0.01);而SUI組與SUI+POP組比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。
　　3)Smad3mRNA在SUI組、SUI+POP組和對(duì)照組陰道壁組織中表達(dá)量分別為

13、（0.091±0.011）、（0.088±0.012）和（0.272±0.029），SUI組、SUI+POP組與對(duì)照組比較差異均有顯著性(P＜0.01);而SUI組與SUI+POP組比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。
　　3.SUI患者組織中TGF-β1和CTGF的關(guān)聯(lián)性分析
　　相關(guān)分析顯示:SUI組陰道壁組織中TGF-β1與CTGF呈正相關(guān)(r=0.959，P＜0.05)，TGF-β1與Smad3的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.