重組鈣網(wǎng)蛋白39-272片段誘導(dǎo)CD1dhiCD5+B細(xì)胞分化為抗體分泌細(xì)胞的研究.pdf

1、鈣網(wǎng)蛋白（Calreticulin，CRT）是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中高度保守的糖蛋白質(zhì)，能夠發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)、協(xié)助新合成的蛋白質(zhì)正確折疊、參與MHCI類分子復(fù)合物的組裝等功能。此外，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，CRT還能夠出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面和細(xì)胞外微環(huán)境中，參與凋亡細(xì)胞清除以及抗腫瘤免疫等過程。在自身免疫病患者體液中出現(xiàn)可溶性CRT還提示其可能參與自身免疫病的發(fā)生與發(fā)展。
　　我們前期的研究工作發(fā)現(xiàn)，原核重組表達(dá)的小鼠CRT片段39-272（

2、rCRT/39-272）具有超強(qiáng)的免疫生物學(xué)活性，能刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO和TNF-α，還能刺激B細(xì)胞增殖，分泌IL-6、IL-10等細(xì)胞因子；并且能誘導(dǎo)B細(xì)胞發(fā)生抗體類別轉(zhuǎn)換。最近的研究結(jié)果表明，rCRT/39-272可以活化具有免疫調(diào)節(jié)功能的可分泌IL-10的CD1dhiCD5+B細(xì)胞（B10細(xì)胞），通過IL-10依賴的方式抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。腹腔注射rCRT/39-272或者過繼轉(zhuǎn)移rCRT/39-272活化的B10細(xì)

3、胞能夠抑制小鼠實(shí)驗(yàn)型自身反應(yīng)性腦脊髓炎（EAE）的發(fā)病。近期的研究發(fā)現(xiàn)，除了IL-10依賴的途徑之外，B10細(xì)胞還可以通過分泌抗體的方式來抑制T細(xì)胞應(yīng)答。
　　在我們前期已取得的進(jìn)展的基礎(chǔ)上，本課題重點(diǎn)研究rCRT/39-272誘導(dǎo)CD1dhiCD5+B細(xì)胞分化為抗體分泌細(xì)胞（antibody-secreting cells，ASCs）的作用。B細(xì)胞經(jīng)rCRT/39-272刺激后，ASCs的比例明顯升高，并且促進(jìn)ASCs分化的轉(zhuǎn)錄

4、因子blimp1，xbp1，irf4和 il-10的表達(dá)水平顯著增強(qiáng)，而抑制ASCs分化的轉(zhuǎn)錄因子pax5和bcl6的表達(dá)水平則顯著下調(diào)。腹腔注射rCRT/39-272的小鼠脾臟中具有ASCs表型的細(xì)胞比例明顯升高。通過細(xì)胞表面染色的方法我們確定了rCRT/39-272誘導(dǎo)的ASCs的表型是CD1dhiCD5+，與調(diào)節(jié)性B10細(xì)胞的表型一致。rCRT/39-272能夠在體外刺激CD1dhiCD5+ B細(xì)胞表達(dá)與ASCs分化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子

5、，并且可以分泌泛特異性、自身反應(yīng)性的IgM抗體。經(jīng)rCRT/39-272免疫的小鼠脾臟CD1dhiCD5+B細(xì)胞能分化為分泌特異性IgM抗體的ASCs。
　　腹腔注射rCRT/39-272能夠降低小鼠EAE的病情嚴(yán)重性，并且在此EAE小鼠脾臟中可以檢測到ASCs比例顯著升高。表型分析證實(shí)這些ASCs來源于CD1dhiCD5+B細(xì)胞，提示rCRT/39-272在體內(nèi)激活了調(diào)節(jié)性B10細(xì)胞，并誘導(dǎo)其分化為ASCs，可能通過抗體依賴的方