分枝桿菌細(xì)胞全容物在細(xì)菌抵御巨噬細(xì)胞降解作用的研究.pdf

1、結(jié)核桿菌是一種慢生長胞內(nèi)細(xì)菌，能夠在細(xì)胞內(nèi)存活并緩慢增殖，在免疫系統(tǒng)功能下降時，細(xì)菌爆發(fā)性增值并引起嚴(yán)重肺部炎癥，威脅生命。結(jié)核桿菌作為一種胞內(nèi)細(xì)菌，具有逃避免疫細(xì)胞攻擊的特點(diǎn)，研究其對免疫系統(tǒng)攻擊機(jī)制對研發(fā)特效抗結(jié)核藥物以及新的檢測手段的發(fā)現(xiàn)具有十分重要的意義。位于細(xì)胞壁外側(cè)的脂多糖可以引發(fā)多種免疫反應(yīng)，尤其是LAM/LM（脂阿拉伯甘露糖聚糖/脂甘露糖聚糖）被認(rèn)為介導(dǎo)了Th1/Th2型細(xì)胞免疫反應(yīng)，決定了細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)的存活。然而，結(jié)核

2、桿菌與細(xì)胞互作是一個復(fù)雜的免疫反應(yīng)，尋找具有免疫逃避功能的分子，需要從不同水平進(jìn)行檢測，包括從細(xì)菌水平到分子水平如LAM等，才能確認(rèn)靶分子并對細(xì)菌與細(xì)胞互作進(jìn)行真實(shí)的表述。
　　由于結(jié)核桿菌具有高的致病性，恥夠桿菌常作為替代菌對結(jié)核相關(guān)特性進(jìn)行研究。本論文使用恥垢分枝桿菌及其細(xì)胞全容物利用氣霧攻擊法，對小鼠肺部進(jìn)行侵染，同時利用巨噬細(xì)胞做了相應(yīng)的體外實(shí)驗(yàn)，對細(xì)菌在細(xì)胞以及肺部互作規(guī)律進(jìn)行描述，為細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)存活相關(guān)活性因子提供了實(shí)

3、驗(yàn)依據(jù)，并為進(jìn)一步分選有效組分提供研究手段。
　　本課題使用了恥垢分枝桿菌和大腸桿菌兩種細(xì)菌對小鼠肺臟進(jìn)行了侵染，發(fā)現(xiàn)這兩種細(xì)菌在存活和被清除的特點(diǎn)上存在差異。在較低侵染濃度時(MOI≤10以及≤108CFU/mouse)兩種細(xì)菌都表現(xiàn)為迅速被清除，當(dāng)侵染濃度較高時(MOI≥100以及≥109CFU/mouse）表現(xiàn)為肺臟清除細(xì)菌速率減慢，甚至不能控制細(xì)菌的增值，于是選擇適當(dāng)?shù)募?xì)菌侵染濃度（MOI=10以及107CFU/mouse

4、）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌在24-72h內(nèi)表現(xiàn)為被清除，但恥垢分枝桿菌清除速率較大腸桿菌的要慢，于是利用兩種細(xì)菌的細(xì)胞全溶解物(WCL)對這兩種模型進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌細(xì)胞全容物影響細(xì)菌存活和清除的規(guī)律，且恥垢分枝桿菌WCL(S)降低了大腸桿菌被清除的速率。進(jìn)一步利用分離的細(xì)胞壁組分對這兩中模型進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌細(xì)胞全容物影響巨噬細(xì)胞功能，對細(xì)菌存活率有較大影響，WCL(S)具有幫助大腸桿菌提高在細(xì)胞內(nèi)存活能力。同時檢測了細(xì)胞形態(tài)以及肺部損傷與