基因CARD9在麻風(fēng)病例及分枝桿菌感染的巨噬細(xì)胞中的表達(dá)研究.pdf

1、研究背景:
　　麻風(fēng)病又稱漢森氏病，是由麻風(fēng)分枝桿菌感染易感個(gè)體導(dǎo)致的慢性肉芽腫性傳染病，主要侵犯皮膚和外周神經(jīng)，晚期可產(chǎn)生不可逆性畸殘發(fā)生。在機(jī)體識(shí)別和抵御麻風(fēng)分枝桿菌的過程中，固有免疫和適應(yīng)性免疫都發(fā)揮了重要的作用。由于機(jī)體對(duì)麻風(fēng)分枝桿菌的免疫反應(yīng)不同，使麻風(fēng)臨床表現(xiàn)分為五型，且呈連續(xù)漸變的系譜狀分布。麻風(fēng)分枝桿菌至今未被成功地體外培養(yǎng)，我們對(duì)于麻風(fēng)分枝桿菌的認(rèn)識(shí)還很有限，這也限制了我們對(duì)麻風(fēng)發(fā)病機(jī)制的深入研究。
　　基

2、因CARD9位于9號(hào)染色體上，編碼胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitmentdomain protein9，CARD9)。CARD9蛋白是CARD蛋白家族成員之一，是一種重要的銜接蛋白，能通過蛋白-蛋白相互作用調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)。CARD9是胞漿蛋白，在多種組織中都有表達(dá)，如:胸腺、脾、肺、骨髓等，尤其在骨髓來源巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞中大量表達(dá)。它能調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，高效整合多種固有免疫受體傳導(dǎo)的信號(hào)，參與機(jī)體抵御真菌、細(xì)

3、菌、病毒等多種病原微生物的免疫應(yīng)答。
　　研究目的:分析麻風(fēng)患者與健康對(duì)照在皮膚組織和外周血中基因CARD9及其所在通路相關(guān)基因的表達(dá)差異，并利用小鼠巨噬細(xì)胞系進(jìn)行感染實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，明確基因CARD9與麻風(fēng)病之間的相關(guān)性，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步的探討。
　　研究方法:
　　1.采用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-Seq)技術(shù)對(duì)27例（多菌型19例，少菌型8例）麻風(fēng)患者的皮損組織及18例健康志愿者的正常皮膚組織進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，分析CAR

4、D9的表達(dá)差異;采用qPCR技術(shù)檢測(cè)并比較11例患者皮損和5例健康對(duì)照正常皮膚組織中CARD9的mRNA表達(dá)水平;采用qPCR技術(shù)檢測(cè)并比較10例患者和11例健康對(duì)照全血中CARD9的mRNA的表達(dá)水平。
　　2.從27例麻風(fēng)患者及18例健康志愿者皮膚組織轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)中選取與CARD9蛋白參與通路相關(guān)基因進(jìn)行表達(dá)差異分析。
　　3.采用qPCR技術(shù)測(cè)定用不同感染濃度的海魚分枝桿菌刺激小鼠RAW264.7細(xì)胞后Card9的m

5、RNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.CARD9基因在麻風(fēng)病例皮損中的表達(dá)明顯高于健康對(duì)照正常皮膚中，且此差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(RNA-Seq: p＜7.92E-5，qPCR: p＜0.007)，多菌型和少菌型患者之間的表達(dá)差異也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.022)，在外周全血中CARD9基因表達(dá)未見明顯差異(p＜0.124)。
　　2.13個(gè)與CARD9通路相關(guān)的基因在麻風(fēng)病例皮損與健康對(duì)照正常皮膚中表達(dá)存在顯著差異(p＜