虎糞細菌區(qū)系16SrDNA動態(tài).pdf

1、　　試驗首先對虎糞微生物區(qū)系的核酸提取方法進行了篩選，并針對虎糞微生物區(qū)系的特殊性對其16SrDNA的PCR擴增進行了組分的優(yōu)化。通過建立16SrDNA克隆文庫對虎糞微生物區(qū)系的多樣性進行了研究。在此基礎上利用PCR-DGGE技術，對3只東北虎及2只白孟加拉虎的糞微生物區(qū)系進行了觀察發(fā)現，虎的懷孕期微生物呈現相對穩(wěn)定的帶型變化，同時，使用抗生素及應激反應等均可顯著地改變虎糞微生物區(qū)系的動態(tài)變化過程。 1用于虎糞微生物區(qū)系分子生

2、態(tài)學研究核酸提取方法的篩選　　結果表明，改良CTAB法抽提獲得細菌核酸的PCR產物在DGGE凝膠上獲得的條帶最多，結果穩(wěn)定。綜上可見，采用超聲波法裂解細菌，再以改良CTAB法抽提細菌核酸，適用于虎糞微生物區(qū)系的研究。 2.虎糞微生物區(qū)系PCR擴增反應條件的優(yōu)化　　結果表明，在模板DNA為1-10ng，MgCL2(25mM)為12μL，DNTP為8pM，引物為190pM，可獲最佳結果。與PCR常規(guī)條件相比較，產物量增加。

3、 3.根據16SrRNA基因序列對虎糞細菌區(qū)系的分析　　為研究虎糞微生物區(qū)系建立了虎糞細菌的16SrDNA文庫。通過EcoRⅠ和HindⅢ分別對陽性克隆進行酶切分析，從東北虎和白虎的16SrDNA文庫中分別獲得了15和14個具有酶切差異的克隆。 4.應用變性梯度凝膠電泳研究虎糞細菌區(qū)系的多樣性動態(tài)　 結果表明，懷孕期動物的糞微生物區(qū)系相對的穩(wěn)定性，服用呋喃妥因等抗生素，同樣可顯著改變糞中微生物細菌多樣性，并影響糞中細菌區(qū)