15種海參骨片形態(tài)、生化組分及線粒體16SrDNA序列的初步分析.pdf

1、本文對(duì)采自國(guó)內(nèi)外的15種海參分別分析了其骨片形態(tài)、可溶性蛋白含量、多糖含量和線粒體16S rDNA序列多樣性，以期為這些海參的快速鑒別、開(kāi)發(fā)利用及系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系研究提供基礎(chǔ)依據(jù)。 15種海參的骨片形態(tài)學(xué)比較表明，15種海參的背脊部骨片類型包括桌形體、扣形體、穿孔板、桿狀體、C形體和花紋樣體6種，其中10種海參存在桌形體和扣形體，6種海參存在穿孔板，5種海參存在桿狀體，C形體在綠刺參和棕色等刺參2種海參中發(fā)現(xiàn)，花紋樣體僅在綠刺參中觀

2、測(cè)到。利用骨片的種類就可以區(qū)分多數(shù)海參，如果再結(jié)合海參不同骨片的相對(duì)比例可將15種海參完全分開(kāi)，同時(shí)觀察還發(fā)現(xiàn)，海參骨片形態(tài)特征相當(dāng)豐富，即使同一類型骨片，其細(xì)微特征仍存在明顯不同，說(shuō)明利用骨片形態(tài)特征進(jìn)行海參的快速鑒定是可行的。 采用三種不同處理(0.1mol/LNaOH、0.1mol/LHCL、dH2O)獲得15種海參的可溶性蛋白，檢測(cè)表明，海參堿溶性蛋白含量均高于酸溶性、水溶性蛋白含量，三種處理方法獲得的仿刺參可溶性蛋白含

3、量分別為3.917％、0.203％、0.243％。堿溶性蛋白含量最高的是具疣擬刺參(4.129％)，酸溶性蛋白含量和水溶性蛋白含量最高的均是二色桌片參(0.424％、0.790％)，黃乳海參三種方法獲得的可溶性蛋白含量(0.776％、0.1％、0.07％)均為最低。15種海參的多糖含量比較表明，黃乳海參的多糖含量最高(32.61％)，黑乳海參的多糖含量最低(4.98％)，仿刺參的的多糖含量?jī)H為8.31％。巴比妥瓊脂糖電泳檢測(cè)不同海參多糖

4、的電泳行為以反映各海參多糖的種類，初步分析結(jié)果表明，墨西哥等刺參、紅腹海參、墨西哥海參、糙海參等海參多糖電泳譜帶出現(xiàn)一條清晰的主帶，仿刺參、綠刺參、加州擬刺參、棕色等刺參等海參多糖電泳譜帶除主帶外還出現(xiàn)明顯的拖帶現(xiàn)象，說(shuō)明這些海參的多糖種類比較復(fù)雜，還有待進(jìn)一步分析。 10種海參的線粒體16S rDNA采用PCR技術(shù)擴(kuò)增并測(cè)序，獲得大小為566bp的序列，利用DNAsp4.0分析比較10種海參的堿基組成、各堿基變異位點(diǎn)數(shù)、插入或

5、缺失位點(diǎn)數(shù)，并采用Mega4.0分析彼此問(wèn)的遺傳距離。結(jié)果發(fā)現(xiàn)10種海參富含AT堿基，A+T的含量平均為57.0％，不同種海參間發(fā)生堿基轉(zhuǎn)換、顛換及發(fā)生插入或缺失變異的位點(diǎn)數(shù)差異很大，10種海參彼此間的遺傳距離在0.007-0.316之間。所得結(jié)果與GenBank中10種海參的相應(yīng)序列進(jìn)行比對(duì)分析，同時(shí)用Mega4.0和PAUP*4.0b10軟件構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，分析其親緣關(guān)系。結(jié)果表明，利用16S rDNA序列的差異可以將分屬于海參科與刺參