應(yīng)用線粒體序列對(duì)幾種海參的初步鑒定及其在海參深加工產(chǎn)品上的應(yīng)用.pdf

1、海參在分類上屬于棘皮動(dòng)物門中現(xiàn)存的六個(gè)綱之一的海參綱。海參綱根據(jù)海參的形態(tài)特征如：觸手的形狀、管足和呼吸樹的有無(wú)分為6個(gè)目。而在科的水平上，其分類的主要依據(jù)是埋沒于外皮之下的微小的石灰質(zhì)骨片，其中海參咽部的鈣質(zhì)骨板(石灰環(huán))的形態(tài)在海參分類上很重要。在種的水平上，其形態(tài)上的差別較小，對(duì)海參進(jìn)行種的水平上的區(qū)分沒有非常精確有效的方法。對(duì)于已被加工過的海參產(chǎn)品則更缺乏科學(xué)的鑒定方法，需要尋找一種簡(jiǎn)便準(zhǔn)確的方法對(duì)加工后的海參進(jìn)行鑒定。

2、 采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)對(duì)日本刺參、大連參、日本關(guān)西參、北海道刺參、俄羅斯紅參、烏棗身、紅海參、白肛海地瓜、紅腹海參、小梅花參、黑海參的線粒體COI序列進(jìn)行了擴(kuò)增，電泳檢測(cè)在690bp左右得到了清晰的擴(kuò)增條帶，PCR產(chǎn)物純化后與T載體連接，進(jìn)行克隆、測(cè)序，分別得到了691-692bp之間的堿基序列，這7個(gè)種類海參的COI片段的堿基組成差別都不大，GC含量分布在40.0％-44.6％之間。用MEGA軟件檢測(cè)到，以日本刺參為參照數(shù)據(jù)，

3、白肛海地瓜、黑海參、紅腹海參、紅海參、烏棗參、小梅花參變異位點(diǎn)比較多，其中小梅花參變異位點(diǎn)最多，有124個(gè)變異位點(diǎn)。而日本刺參、北海道刺參、大連參、俄羅斯紅參和關(guān)西參變異位點(diǎn)很少，在692bp中只有18個(gè)變異位點(diǎn)；白肛海地瓜、黑海參、紅腹海參、小梅花參與其他海參的遺傳距離都較大，分別約為0.196-0.212、0.197-0.225、0.196-0.243、0.179-0.213，紅海參約0.095-0.229，其他海參間僅為0.003

4、-0.012之間；通過計(jì)算不同個(gè)體間的遺傳距離構(gòu)建NJ樹和ME樹，在NJ樹和ME樹中，都可以看到兩個(gè)分支：俄羅斯紅紅參、日本刺參、關(guān)西參、北海道刺參、大連參、烏棗參和紅海參、白肛海地瓜為一支，其他的海參為一支。 采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)對(duì)日本刺參、大連參、日本關(guān)西參、菲律賓刺參、俄羅斯紅參、烏棗身、紅海參、白肛海地瓜、蛇海參、北極參、靴參的線粒體16Sr序列進(jìn)行了擴(kuò)增，電泳檢測(cè)在330bp左右得到了清晰的擴(kuò)增條帶，PCR產(chǎn)物

5、純化后與T載體連接，進(jìn)行克隆、測(cè)序，7個(gè)種類海參的16Sr片段的堿基組成差別不大，長(zhǎng)度分布在330-334bp，只有北極參和蛇海參分別是320bp和310bp。GC含量分布在39.4％-48.1％之間，白肛海地瓜、蛇海參、北極參、菲律賓參變異位點(diǎn)比較多，而日本刺參、大連參、俄羅斯紅參和關(guān)西參、烏棗參和靴參變異位點(diǎn)很少，且變異位點(diǎn)基本一致，關(guān)西參的變異位點(diǎn)相對(duì)較多，其中俄羅斯紅參只有一個(gè)變異位點(diǎn)，大連參有四個(gè)變異位點(diǎn)；白肛海地瓜、北極參、

6、蛇海參、菲律賓參與其他海參的遺傳距離都較大，分別約為0.150-0.291、0.140-0.282、0.140-0.277、0.194-0.291，大連參，日本刺參，關(guān)西參和俄羅斯紅參遺傳距離很??；在NJ樹和ME樹中，都可以看到兩個(gè)分支：俄羅斯紅參、日本刺參、關(guān)西參、大連參、烏棗參、靴參和紅海參、白肛海地瓜為一支，其他的海參為一支。 采用異丙醇與乙酸鈉沉淀的改良方法從海參營(yíng)養(yǎng)液中提取海參的DNA，通過COI引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)