磷脂酶D生產菌的篩選及其基于16SrDNA的進化研究.pdf

1、磷脂酶D(PLD:EC3.1.4.4)可催化磷脂水解為磷脂酸,同時還可催化自然界中含量豐富的磷脂酸膽堿轉酯為自然界中含量稀少甚至不存在的磷脂或磷脂衍生物。該轉酯反應對于合成稀有天然磷脂組分及人工合成磷脂具有不可替代的優(yōu)勢。到目前為止,不少生產PLD的菌株已經被成功分離出來。但對于工業(yè)化生產來講,獲取更多性能穩(wěn)定的酶源是必要的。
　　 本文從北京昌平美亞斯磷脂廠園區(qū)土壤內篩選出了5個生產PLD的放線菌(HF-0,HF-2,HF-9

2、,HF-23和HF-36)。5株菌所產PLD均表現出了不同的水解及轉酯活性。其中,HF-23所產PLD表現出了最高的水解活性(6.8U／mg)和最好的從磷脂酰膽堿轉化為磷脂酰絲氨酸的轉酯特性。此結果表明,HF-23具有良好的產酶性能,轉酯活性較強,擁有制備高純度磷脂酰絲氨酸的商業(yè)應用價值。另外,通過在反應體系中添加Ca2+可確定,Ca2+對于同時具有水解和轉酯活性的PLD酶具有雙重影響,可降低轉酯活性而提高水解活性,對只具有水解活性不表

3、現轉酯活性的PLD酶則無影響。
　　 經過對形態(tài)學、生理生化反應特征的觀察,再結合16S rDNA序列比對確定本文所篩5個菌株同為鏈霉菌屬。以本文所分離5個菌株和前人所報道的PLD生產菌株的16S rDNA為基礎構建進化樹,可見進化樹中所包含的菌株主要分成了兩個類群(HF-23位于類群Ⅰ而本文其他四個菌株位于類群Ⅱ)。與此同時,大多已知的具有高催化活性的PLD的生產菌都屬于類群Ⅰ,表明類群Ⅰ所包含的菌株傾向于生產結構較為保守,活