磷脂酶C和磷脂酶D在ParA1誘導(dǎo)煙草懸浮細胞防衛(wèi)反應(yīng)中的作用.pdf

1、磷脂酶C（phospholipase C，PLC）和磷脂酶D（phospholipase D，PLD）信號途徑在植物和動物防衛(wèi)反應(yīng)中起著重要作用。PLC的水解產(chǎn)物二酯酰甘油（diacylglycerol，DAG）和三磷酸肌醇（inositol1，4，5-trisphosphate，IP3），以及PLC和PLD的共同產(chǎn)物磷脂酸（phosphatidic acid，PA）是胞內(nèi)重要的第二信使。
　　 Elicitin是Phytoph

2、thora和Pythium2個屬的病原菌產(chǎn)生的一種胞外蛋白質(zhì)，在煙草上引起系統(tǒng)獲得抗性（systemic acquired resistance，SAR）和過敏反應(yīng)（hypersensitive response，HR）。ParA1是來源于P.parasitica的一種酸性elicitin。PLC和PLD是否參與ParA1誘導(dǎo)的防衛(wèi)反應(yīng)還缺乏系統(tǒng)研究。本研究采用藥理學(xué)方法，以ParA1作為激發(fā)子，以煙草懸浮細胞為材料，通過生物化學(xué)、細胞

3、化學(xué)、半定量RT-PCR（reversetranscriptase-polymerase chain reaction，RT-PCR）和高效液相色譜（highperformance liquid chromatography，HPLC）等技術(shù)測定了一系列防衛(wèi)反應(yīng)。所得結(jié)果如下：
　　 1.為了研究PLC和PLD是否參與了ParA1誘導(dǎo)的煙草懸浮細胞的死亡，用PLC抑制劑新霉素和U73122、PLD抑制劑1-butanol、2-b

4、utanol和tert-butanol提前處理ParA1誘導(dǎo)的細胞，測定細胞死亡被抑制情況。結(jié)果表明新霉素（100μmol·L-1）和U73122（20μmol·L-1）對細胞的死亡抑制率分別為28.4％和97.5％，1-butanol（0.2％）、2-butanol（0.2％）對細胞死亡的抑制率分別是54.2％和35.8％，而1-butanol的類似物tert-butanol沒有效果。這些結(jié)果說明PLC和PLD都參與了ParA1誘導(dǎo)的

5、細胞死亡。
　　 2.在煙草懸浮細胞中添加PLC和PLD抑制劑，比較煙草懸浮細胞受ParA1誘導(dǎo)后多種防衛(wèi)反應(yīng)的差別。PLC抑制劑（新霉素和U73122）處理ParA1誘導(dǎo)的煙草懸浮細胞后，氧進發(fā)、胞外介質(zhì)堿性化和scopoletin積累都能顯著地被抑制；5種防衛(wèi)基因hin1、hsr203J、PR（pathogenesis-related）-1a，PR-1b及PAL等的表達也都受到不同程度地抑制。PLD抑制劑（1-butanol

6、和2-butanol）對氧進發(fā)、胞外堿性化、scopoletin積累和防衛(wèi)基因表達也都有部分抑制作用，其中0.2％的1-butanol和2-butanol的抑制作用最大，而1-butanol的類似物tert-butanol對ParA1誘導(dǎo)的防衛(wèi)反應(yīng)沒有任何作用。
　　 3.ParA1能夠誘導(dǎo)DGK基因表達明顯增強，U73122處理的細胞，其表達量有輕微的抑制作用。DGK的抑制劑R59022在不同時間對細胞死亡和氧進發(fā)的抑制情況不