PGD210轉(zhuǎn)染DC腫瘤疫苗的初步研究.pdf

1、目的:比較PGD210轉(zhuǎn)染的DC與未經(jīng)轉(zhuǎn)染的DC,刺激T細(xì)胞誘發(fā)免疫應(yīng)答,有效激發(fā)T細(xì)胞并殺傷K562細(xì)胞的功能.編碼腫瘤特異性抗原(TSA)的基因PGD210導(dǎo)入DC的方法,為將來制成PGD210轉(zhuǎn)染DC疫苗用來治療慢性髓細(xì)胞白血病作一個前期的初步研究.方法:①用Dailey教授饋贈的PGD210質(zhì)粒轉(zhuǎn)入由DH5α搖菌后制備成的感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)少量提取的質(zhì)粒分別進(jìn)行酶切鑒定和PCR鑒定的方法證實(shí)為PGD210質(zhì)粒,然后對其進(jìn)行大量抽提.

2、②用電轉(zhuǎn)染的方法將大量抽提的PGD210質(zhì)粒轉(zhuǎn)入PBMNC誘生法制成的DC.用EGFP熒光質(zhì)粒作為同等條件電轉(zhuǎn)染的對照,并用RT-PCR鑒定PGD210質(zhì)粒轉(zhuǎn)入DC后轉(zhuǎn)錄的mRNA產(chǎn)物,證實(shí)電轉(zhuǎn)染成功.③用帶有PGD210質(zhì)粒的DC與未經(jīng)轉(zhuǎn)染的DC,分別刺激T細(xì)胞,再用流式細(xì)胞儀PI染色法比較殺傷K562細(xì)胞的功能.結(jié)果:①酶切鑒定和PCR鑒定的方法均證實(shí)為PGD210質(zhì)粒.②EGFP熒光質(zhì)粒作為同等條件電轉(zhuǎn)染的對照和RT-PCR鑒定均

3、證實(shí)PGD210質(zhì)粒通過電轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)入DC.③PGD210轉(zhuǎn)染的DC刺激T細(xì)胞(5:1,10:1,20:1)殺傷K562細(xì)胞的百分比分別是(26.1﹪,32.5﹪,39.7﹪),未經(jīng)轉(zhuǎn)染的DC刺激T細(xì)胞(5:1,10:1,20:1)殺傷K562細(xì)胞的百分比分別是(4.8﹪,14.4﹪,27.2﹪),spss檢測二者值比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.結(jié)論:PGD210轉(zhuǎn)染的DC刺激T細(xì)胞誘發(fā)免疫應(yīng)答,有效激發(fā)T細(xì)胞并殺傷K562細(xì)胞的功能強(qiáng)于未經(jīng)轉(zhuǎn)染的DC