重組pcdna3.1hbmp2轉染兔adscs體外誘導成骨分化的實驗研究

1、遵義醫(yī)學院碩士學位論文重組pcDNA3.1-hBMP-2轉染兔ADSCs體外誘導成骨分化的實驗研究姓名：劉凡凡申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學（骨）指導教師：安榮澤20100401遵義醫(yī)學院研究生乍業(yè)論文 章組p c D N A 3 ．卜h B M P - 2 轉染免A D S C s 體外誘導成骨分化的實驗研究基兇轉染對脂肪干細胞的生長、增殖無明顯影響。3 、連續(xù)三天細胞培養(yǎng)上清液h B M P ．2 E L I S A 檢測表明h B

2、 M P ．2 組在第3 天、第7 天、第l 4 天、第2 1 天時的h B M P ．2 表達量均高于相應時段的E G F P 組及未轉染組( 組間p0 ．0 5 ) 。根據(jù)h B M P ．2 標準蛋白曲線換算，在上述培養(yǎng)時段內，h B M P ．2 組細胞上清液中的h B M P ．2 含量約l2 ．36 n g h B M P ．2 ( 細胞接種濃度8 X 10 4 個／孔) 。4 、成骨分化指標：I 型膠原免疫細胞化學染色顯示

3、h B M P ．2 組細胞內表達出I 型膠原，均高于E G F P 組及未轉染組( p < 0 ．0 5 ) ；經(jīng)堿性磷酸酶活性檢測試劑盒檢測各組細胞不同時段上清液中的A L P 活性發(fā)現(xiàn)h B M P ．2 組均較E G F P 組及未轉染組高( 組間p < 0 ．0 5 ) ；且隨培養(yǎng)時間延長h B M P ．2 組A L P 的活性逐漸增強( 組內p < 0 ．0 5 ) ；2 ％茜素紅對轉染后連續(xù)培養(yǎng)1 4

4、天的細胞進行鈣結節(jié)染色發(fā)現(xiàn)僅h B M P ．2 組有較多橘紅色結節(jié)，而E G F P 組及未轉染組無明顯發(fā)現(xiàn)。結論：成功構建了h B M P ．2 基因的真核表達載體一重組p c D N A 3 ．1 ．h B M P ．2 質粒；利用脂質體L i p o f e c t a m i n e T M 2 0 0 0 可以介導h B M P ．2 基因成功轉染A D S C s ，并對A D S C s 的生長、增殖無明顯影響，并可通過