脫細胞羊膜在兔股骨近端誘導成骨的實驗研究.pdf

1、目的： 初步探討人完全脫細胞羊膜(humanacellularamnioticmembrane，HAAM)的在兔股骨近端的成骨誘導能力，為羊膜作為骨組織工程自然衍發(fā)基質(zhì)提供實驗依據(jù)，進而為骨缺損和骨融合的治療提供新的治療思路。 方法： 使用本課題組研發(fā)的羊膜無酸堿脫細胞專利技術(shù)制取HAAM，約2.0cm×2.0cm大小，做成約為0.5cm×0.4cm×0.3cm大小卷團狀。27只成年大耳白兔，隨機分為羊膜組、PL

2、GA組和空白對照組，每組進而分為1周、2周、4周三小組，每小組3只?？瞻讓φ战M在兔股骨背側(cè)近端(大轉(zhuǎn)子下)單純制作直徑約0.6cm的骨缺損，而羊膜組在兔股骨近端骨缺損處植入HAAM，PLGA組則植入PLGA(約0.5cm×0.4cm×0.3cm大小)。分別在1、2、4周時處死兔子，截取標記的骨缺損部位。甲醛固定后常規(guī)石蠟定向包埋，切片，分別對其行HE染色，光學顯微鏡組織學觀察和免疫組織化學染色，對比觀察各組骨缺損處的成骨能力。

3、結(jié)果： 組織學觀察：術(shù)后1周時，羊膜組中血管長入層狀排列的羊膜基質(zhì)之間，大量的間充質(zhì)細胞隨血管一起侵入羊膜基質(zhì)間隙。細胞附著于羊膜表面，并沿羊膜基質(zhì)纖維方向成極性生長。在羊膜與髓腔交界處向植入物內(nèi)部延伸。未見炎性攻擊和液化現(xiàn)象；PLGA組血細胞侵入PLGA間隙，細胞同PLGA表面未粘附。未見免疫攻擊及炎性反應?？瞻捉M骨缺損處血腫形成，可見大量紅細胞、間充質(zhì)細胞、脂肪滴及毛細血管。術(shù)后2周時，羊膜組中HAAM被進一步吸收，血管生成

4、減少，緊貼HAAM基質(zhì)邊緣，間充質(zhì)細胞分化為軟骨細胞，軟骨細胞后方跟隨著一層較厚的較成熟軟骨組織。細胞在材料表面黏附良好，且在羊膜空隙中相互之間有突起連接，形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。PLGA組中PLGA開始軟化降解，PLGA間隙形成肉芽組織，未見軟骨細胞?？瞻捉M骨缺損處演變轉(zhuǎn)化為肉芽組織，血管生成活躍。術(shù)后4周時，羊膜組中羊膜組織基本消失，血管生成減少，肥大的軟骨細胞增多，骨缺損處逐漸填充以軟骨組織。PLGA組中PLGA降解殘余部分可見細胞附著，肉

5、芽組織中血管豐富，但未見軟骨細胞及成骨現(xiàn)象?？瞻捉M中骨缺損處填充肉芽組織，血管生成仍然活躍，未見向軟骨及骨組織轉(zhuǎn)化的跡象。VEGF染色觀察：術(shù)后1周時，羊膜組在HAAM表面及間隙呈陽性表達，PLGA組PLGA膜間隙中有散在的著色，空白組很少表達。術(shù)后2周時，羊膜組新生血管周圍呈較強陽性表達，PLGA組表達稍弱，空白組散在表達陽性。4周時，羊膜組軟骨組織內(nèi)幼稚的軟骨細胞VEGF表達陰性，成熟和肥大的軟骨細胞較強陽性表達，在與原始骨小梁相連

6、處的肥大軟骨細胞亦呈較強陽性表達。此時，PLGA組隨血管的長入表達開始增強?？瞻捉M因為肉芽組織中毛細血管豐富表達活躍。BMPs染色觀察：術(shù)后1周時，各組的血管附近均呈較強陽性表達。術(shù)后2周時，羊膜組新生血管周圍呈較強陽性表達，PLGA組表達減弱，空白組散在表達陽性。4周時，羊膜組軟骨細胞表達陰性，成熟和肥大的軟骨細胞陽性表達稍強。PLGA組隨血管的長入表達開始增強?？瞻捉M陽性表達轉(zhuǎn)強。 結(jié)論： 相比于PLGA和空白對照，