EB病毒相關(guān)T細(xì)胞淋巴組織增殖性疾病的克隆性研究及EB病毒在其發(fā)病機(jī)制中的作用探討.pdf

1、EB病毒相關(guān)淋巴組織增殖性疾病包括臨床上的慢性活動性EB病毒感染、EBV相關(guān)的噬血細(xì)胞綜合征、兒童EBV陽性T細(xì)胞淋巴組織增殖性疾病等一大類疾病，從增殖的淋巴細(xì)胞類型可劃分為B細(xì)胞以及T/NK細(xì)胞兩大類。免疫力正常個體中EB病毒相關(guān)T細(xì)胞淋巴組織增殖性疾病(EB-T LPD)，并不多見，目前報道的病例主要分布在亞洲和南美洲地區(qū)。該病多為系統(tǒng)性疾病，主要累及淋巴結(jié)和肝、脾，也可累及皮膚、胃腸道及其它內(nèi)臟器官。主要臨床表現(xiàn)為:長期（＞3個月

2、）反復(fù)發(fā)熱和全身多器官受損表現(xiàn)。部分患者死于嚴(yán)重并發(fā)癥或進(jìn)展為惡性淋巴瘤，預(yù)后不良。淋巴結(jié)形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為T區(qū)淋巴結(jié)增寬直至正常淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)消失，在炎性反應(yīng)背景中，以核不規(guī)則的中小異型淋巴細(xì)胞浸潤為主，可見散在大細(xì)胞;若病變中細(xì)胞呈單一性改變時，浸潤細(xì)胞以大中細(xì)胞為主。從增生淋巴細(xì)胞的克隆性來看，該病變也包括多克隆、寡克隆和單克隆增生。根據(jù)組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)并結(jié)合克隆性分析，將此類疾病分成不同等級:A1型:多形性組織學(xué)特征及多克隆T細(xì)胞增生;

3、A2型:多形性組織學(xué)特征以及單克隆T細(xì)胞增生;A3型:單形性組織學(xué)特征以及單克隆T細(xì)胞增生;B型:單形性組織學(xué)特征伴單克隆T細(xì)胞增生和暴發(fā)性臨床進(jìn)程。
　　本課題研究本地一組EBV-T LPD的克隆性，并以NK/T細(xì)胞淋巴瘤和鼻咽癌做為對照，研究在三組疾病中的EB病毒基因多態(tài)性和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)，探討EB病毒在EBV-T LPD發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　本課題分為以下三個部分:
　　第一部分 EBV-T LPD中T細(xì)胞受

4、體基因重排克隆性的研究
　　[目的]收集廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2008年8月～2011年3月期間EBV-T LPD病例并檢測其T細(xì)胞受體(TCR)基因重排的情況，研究該組病例中EBV-T LPD的淋巴組織增生的性質(zhì)。
　　[材料和方法]從檔案材料中篩選EBV-T LPD病例，根據(jù)臨床表現(xiàn)、組織形態(tài)學(xué)、免疫標(biāo)記以及EBER原位雜交確認(rèn)診斷，采用BIOMED-2 PCR方案及異源雙鏈分析法，檢測病例T細(xì)胞受體中TCRβ(TCR

5、 B)和TCRγ(TCR G)基因克隆重排情況。
　　[結(jié)果]10例EBV-T LPD中TCRβ(TCR B)和TCRγ(TCR G)基因均為多克隆重排。
　　[結(jié)論]鑒定淋巴細(xì)胞TCR是否為單克隆起源，是鑒別淋巴組織非腫瘤性增生和腫瘤性增生的有力佐證。用BIOMED-2 PCR方案檢測TCR基因重排，是判斷EBV-T LPD淋巴細(xì)胞增生性質(zhì)的客觀準(zhǔn)確的檢測方法。研究中10例EBV-T LPD的TCR基因均為多克隆重排，表明

6、本組病例病變?nèi)詾锳1型，尚未發(fā)展到淋巴瘤階段;值得注意的是即使是A1型患者，其臨床表現(xiàn)也可以是急進(jìn)、兇險的，提示EBV-T LPD中TCR的克隆性與其臨床進(jìn)程并不完全對應(yīng)。
　　第二部分 EBV-T LPD、NK/T細(xì)胞淋巴瘤及鼻咽癌中EBV基因型及變異型的研究
　　[目的]分析廣西地區(qū)與EB病毒相關(guān)的EBV-T LPD、NK/T細(xì)胞淋巴瘤及鼻咽癌中EBV的基因型及基因的多態(tài)性，確定是否存在與EBV-T LPD、NK/T細(xì)胞

7、淋巴瘤及鼻咽癌相關(guān)的特定EBV基因類型，探討廣西地區(qū)EB病毒基因型與這些疾病的關(guān)系，幫助闡明EB病毒的致病機(jī)制。
　　[材料和方法]使用PCR-RFLP和DNA測序方法，擴(kuò)增檢測五個不同的EBV基因片段，研究實(shí)驗中收集的10例EBV-T LPD、16例NK/T細(xì)胞淋巴瘤及54例鼻咽癌中的EBV基因類型和變異情況，統(tǒng)計分析不同EBV類型在三種不同疾病中的比例。
　　[結(jié)果](1)5種EBV基因片段在10例EBV-T LPD、1

8、6例NK/T細(xì)胞淋巴瘤及54例鼻咽癌標(biāo)本中擴(kuò)增成功;(2)EBV-T LPD標(biāo)本中的EBV基因型以A型為主(10/10，100％)，變異型以F型(7/10，70％)、Ⅰ型(10/10，100％)、XhoⅠ-型(10/10，100％)、del-LMP1(10/10，100％)型為主;(3)NK/T細(xì)胞淋巴瘤中的EBV基因型以A型為主(11/16，68.8％)，變異型以F型(13/16，81.3％)、Ⅰ型(13/16，81.3％)、XhoⅠ

9、-型(15/16，93.7％)、del-LMP1(9/16，56.3％)型為主;(4)鼻咽癌中的EBV基因型以A型為主(54/54，100％)，變異型以f型(44/54,81.5％)、Ⅰ型(54/54,100％)、XhoⅠ-型(54/54,100％)、del-LMP1(52/54，96.3％)型為主;(5)通過卡方檢驗，A型EB病毒在三組病例比率的差別有統(tǒng)計學(xué)意義，P=0.000。組間比較，鼻咽癌中A型EB病毒比率比NK/T細(xì)胞淋巴瘤高

10、，P=0.000。(6)F變異型EB病毒在三組病例比率的差別有統(tǒng)計學(xué)意義，P=0.000。組間比較，EBV-T LPD中F變異型EB病毒比率比鼻咽癌高，P=0.003; NK/T細(xì)胞淋巴瘤中F變異型EB病毒比率比鼻咽癌高，P=0.000;(7)Ⅰ變異型EB病毒在三組病例比率的差別有統(tǒng)計學(xué)意義，P=0.006。組間比較，鼻咽癌中Ⅰ變異型EB病毒比率比NK/T細(xì)胞淋巴瘤高，P=0.011。(8)XhoⅠ-變異型EB病毒在三組病例比率的差別無

11、統(tǒng)計學(xué)意義，P=0.195。(9)del-LMP1變異型EB病毒在三組病例比率的差別有統(tǒng)計學(xué)意義，P=0.000。組間比較，EBV-T LPD中del-LMP1變異型EB病毒比率比NK/T細(xì)胞淋巴瘤高，P=0.046;鼻咽癌中del-LMP1變異型EB病毒比率比NK/T細(xì)胞淋巴瘤高，P=0.000。
　　[結(jié)論](1)A型EB病毒株是本地三種EBV相關(guān)疾病/腫瘤的優(yōu)勢病毒株，而B型EB病毒株也參與部分NK/T細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生。(2

12、)本地三種疾病均以“Ⅰ”變異型和XhoⅠ-變異型的EB病毒為主，提示這兩種EB病毒變異型可能與地域分布有關(guān)。(3)本地EBV-T LPD和NK/T細(xì)胞淋巴瘤病例中EB病毒以F變異型為主，與鼻咽癌中以f變異型為主明顯不同，提示EB病毒F變異型與淋巴細(xì)胞病變關(guān)系密切，而f變異型與鼻咽上皮病變關(guān)系密切。(4)del-LMP1變異型與EBV-T LPD、鼻咽癌關(guān)系密切，而NK/T細(xì)胞淋巴瘤中del-LMP1型及wt-LMP1變異型均有出現(xiàn)。(5

13、)除了“F”和“f”變異型顯示出疾病細(xì)胞類型的傾向外，EBV-T LPD中的EBV基因特征與鼻咽癌類似，而與NK/T細(xì)胞淋巴瘤中病毒特征不盡相同。特定的EB病毒基因型及變異型可能選擇性影響某些腫瘤、疾病的發(fā)生。
　　第三部分 EBV-T LPD、NK/T細(xì)胞淋巴瘤及鼻咽癌中NF-κB、bcl-2及survivin的表達(dá)及意義
　　[目的]研究NF-κB、bcl-2及survivin在EBV-T LPD、NK/T細(xì)胞淋巴瘤及鼻

14、咽癌中的表達(dá)情況，旨在探討3個與抗凋亡有關(guān)的蛋白之間的關(guān)系及在不同疾病發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　[材料和方法]采用原位雜交法篩選出18例EBV-T LPD、24例NK/T細(xì)胞淋巴瘤及74例鼻咽癌EBER陽性的標(biāo)本;采用免疫組化法檢測NF-κ B、bcl-2及survivin在18例EBV-T LPD、24例NK/T細(xì)胞淋巴瘤及74例鼻咽癌中的表達(dá)情況。
　　[結(jié)果](1)18例EBV-T LPD、24例NK/T細(xì)胞淋巴瘤及74

15、例鼻咽癌病例其EBER均為陽性;(2)NF-κB、bcl-2及survivin在EBV-T LPD中的表達(dá)率分別為61.1％(11/18)、44.4％(8/18)、16.7％(4/18);(3)NF-κB、bcl-2及survivin在NK/T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)率分別為54.2％(13/24)、37.5％(9/24)、50％(12/24);(4)NF-κ B、bcl-2及survivin在鼻咽癌組織中的表達(dá)率分別為74.3％(55/74

16、)、81.1％(60/74)、58.1％(43/74);(5)通過卡方檢驗，bcl-2在三組病例陽性率的差別有統(tǒng)計學(xué)意義，P=0.000。組間比較，EBV-T LPD中的bcl-2表達(dá)低于鼻咽癌，P=0.004; NK/T細(xì)胞淋巴瘤bcl-2表達(dá)低于鼻咽癌，P=0.000; survivin在三組病例陽性率的差別有統(tǒng)計學(xué)意義，P=0.024。組間比較，EBV-T LPD中survivin表達(dá)低于鼻咽癌，P=0.006。(6)相關(guān)性分析顯

17、示:鼻咽癌中NF-κ B與bcl-2有相關(guān)性，P=0.049，r=0.192。NK/T細(xì)胞淋巴瘤中NF-κB與survivin有相關(guān)性，P=0.000，r=0.553。
　　[結(jié)論]與腫瘤組相比，本組EBV-T LPD中凋亡相關(guān)蛋白bcl-2與survivin的表達(dá)均較低，提示在多克隆階段的EBV-T LPD中，淋巴細(xì)胞的抗凋亡機(jī)制尚未被激活。同為EBV相關(guān)的惡性腫瘤，上述兩種凋亡蛋白的表達(dá)有差異:bcl-2在鼻咽癌病例的表達(dá)高于