海馬神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及相互連接的原子力顯微技術(shù)研究.pdf

1、目的：利用原子力顯微技術(shù)(AFM)研究原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞表面超微結(jié)構(gòu)及相互間的連接結(jié)構(gòu)。 材料和方法：取新生12小時以內(nèi)的Wistar大乳鼠，在無菌條件下原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。選擇生長良好的海馬神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞用2.5％的戊二醛(生理鹽水配制)固定30min，然后用流動三蒸水輕輕沖洗樣品，以去除樣品表面的鹽結(jié)晶。把培養(yǎng)皿剪成合適大小，用雙面膠固定于基底上，待其在空氣中自然干燥后，置于AFM的掃描器上，

2、進(jìn)行掃描成像，成像模式為大氣環(huán)境下的接觸模式(Contact Mode)。 結(jié)果：本實驗中培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞生長狀態(tài)良好。利用AFM觀察顯示：(1)正常海馬神經(jīng)元表面光滑，起伏均勻、規(guī)律，神經(jīng)元多為單個生長，突起之間交織成網(wǎng)，相互間有突觸形成。海馬神經(jīng)元可被胞體上水平的凹溝分為上中下三部分或上下兩部分，神經(jīng)突起均自胞體上部發(fā)出，而沒有從下部發(fā)出者。同時，我們還觀察到海馬神經(jīng)元間存在膜性連接以及長程非突觸性突起連接結(jié)構(gòu)

3、；(2)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞平鋪于培養(yǎng)皿的底部，胞體形狀不規(guī)則，表面較扁平，高度平均為780nm，絕不會超過1μm。突起豐富，但沒有極性，無軸突樹突之分，還觀察到兩膠質(zhì)細(xì)胞間存在長程纖維管狀連接結(jié)構(gòu)。 結(jié)論：在以往的工作中利用AFM觀察到海馬神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞表面一些利用其它顯微技術(shù)難以發(fā)現(xiàn)的超微結(jié)構(gòu)，還發(fā)現(xiàn)了一些用突觸結(jié)構(gòu)難以解釋的連接結(jié)構(gòu)： (1)再次證明原子力顯微技術(shù)是研究細(xì)胞表面超微結(jié)構(gòu)的有用工具； (2)神經(jīng)元和

4、膠質(zhì)細(xì)胞在原子力顯微鏡下具有明顯的形態(tài)學(xué)差異，神經(jīng)元表面飽滿光滑，高度至少在2μm以上。胞體具有明顯的極性，其一端較大，樹突從此端發(fā)出，另一端較小，軸突從此端發(fā)出；突起發(fā)育到一定程度，其極性清晰可辨，有軸突樹突之分。海馬神經(jīng)元可被胞體上水平的凹溝分為上中下三部分或上下兩部分，神經(jīng)突起均自胞體上部發(fā)出，而沒有從下部發(fā)出者；膠質(zhì)細(xì)胞表面較為扁平，高度平均為780nm，絕不會超過1μm。其突起較為豐富，但沒有極性，無軸突、樹突之分；