β淀粉樣肽刺激小膠質細胞誘導海馬神經元凋亡的實驗研究.pdf

1、[目的]
　　 Aβ刺激激活原代培養(yǎng)的小膠質細胞，取小膠質細胞條件培養(yǎng)基作用于原代培養(yǎng)的海馬神經元，觀察Aβ刺激激活小膠質細胞條件培養(yǎng)基對海馬神經元的毒性作用，結合本課題組之前關于小膠質細胞等炎性細胞激活及TNFa在AD發(fā)病中的作用機制的研究，觀察TNF-a、IL-Iβ等細胞因子引起的炎癥反應對海馬神經元的損傷，探討小膠質細胞源性炎性反應在AD發(fā)病中的可能作用途徑和機制，為阿爾茨海默病(AD)的抗炎治療提供一定的理論依據，及能夠

2、為AD的預防和早期治療提供更有力的細胞學基礎。
　　 [方法]
　　 根據本課題組在先前研究中所檢測得到Aβ1-42對體外小膠質細胞中TNF-amRNA表達及TNF-a蛋白外分泌量的影響，獲得Aβ肽對小膠質細胞的最佳刺激方案，用激活后的小膠質細胞條件培養(yǎng)基作用于原代培養(yǎng)的海馬神經元，用western-blot法檢測刺激后海馬神經元內誘導型一氧化碳合酶和硝基酪氨酸的表達水平，獲得最佳刺激方案，用TUNEL法和DNA Lad

3、der凝膠電泳法觀察海馬神經元的凋亡，同時用激酶活性測定法測定凋亡相關蛋白casepase-3的激活程度。
　　 [結果]
　　 1.利用“無血清培養(yǎng)法”進行原代海馬神經元的細胞培養(yǎng)及純化，用免疫細胞化學及免疫熒光的方法對海馬神經元進行鑒定，結果顯示，“無血清培養(yǎng)法”能獲得高純度的海馬神經元。
　　 2.用Aβ肽處理小膠質細胞取用藥24 h之上清來刺激原代培養(yǎng)的海馬神經(最佳刺激濃度及時間來源于本課題組先前研究結

4、果)。
　　 3.Western blot法進行檢測神經元內iNOS和硝基酪氨酸(nitrotyrosine)的水平，可觀察到條件培養(yǎng)基刺激海馬神經元6 h，INOS及NT即有少量的表達，隨著刺激時間的延長，iNOS和硝基酪氨酸的表達愈明顯。
　　 4.TUNEL和DNA電泳鑒定神經元細凋亡程度及刺激前后對照差異，可以觀察到，海馬神經元出現了明顯的凋亡，且隨著刺激時間的延長，凋亡率也在增加。
　　 [結論]