黃芪注射液對腦缺血再灌注大鼠海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)及Apaf-1表達(dá)的影響.pdf

1、腦缺血再灌注損傷是指缺血腦組織在一定條件下恢復(fù)血液供應(yīng)后,出現(xiàn)了更加嚴(yán)重的腦功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷,常見于休克、動脈搭橋、腦血管栓塞再通、體外循環(huán)心臟手術(shù)、心肺腦復(fù)蘇等。缺血性腦血管疾病是臨床神經(jīng)科的常見疾病,其致殘、致死率高,治療該類疾病的原則是及時(shí)恢復(fù)缺血區(qū)的血液供應(yīng),但同時(shí)也造成了再灌注損傷,抑制再灌注損傷已成為治療缺血性腦血管疾病的重要環(huán)節(jié)。研究表明,神經(jīng)元凋亡是腦缺血再灌注損傷的重要機(jī)制之一,而凋亡相關(guān)基因凋亡蛋白酶激活因子-1(

2、Apoptotic Protease-activating Factor-1, Apaf-1)與神經(jīng)元凋亡有著密切的關(guān)系。黃芪注射液是臨床上治療該類疾病的常用藥物,但具體機(jī)制尚未完全闡明。因此本實(shí)驗(yàn)通過建立腦缺血再灌注大鼠模型,在模型的基礎(chǔ)上加用黃芪注射液,觀察黃芪注射液對大鼠腦缺血再灌注海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)及 Apaf-1表達(dá)的影響,探討黃芪注射液抑制腦缺血再灌注損傷的作用機(jī)制。
　　目的:
　　觀察黃芪注射液對大鼠腦缺血再

3、灌注海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)及凋亡相關(guān)基因Apaf-1表達(dá)的影響。
　　方法:
　　將清潔級健康雄性 SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、黃芪注射液組和黃芪注射液溶劑對照組。采用四血管阻斷法建立腦缺血再灌注大鼠模型,除假手術(shù)組外其余三組根據(jù)再灌注不同時(shí)間點(diǎn)再分為0 h,0.5 h,2 h,6 h,24 h,72 h和120 h7個(gè)亞組,于再灌注相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)斷頭取腦。電鏡下觀察大鼠海馬 CA1區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化;免疫組織化學(xué)法檢測大鼠

4、海馬 CA1區(qū)神經(jīng)元 Apaf-1的表達(dá);Western blot法檢測大鼠海馬組織Apaf-1蛋白的表達(dá);RT-PCR法檢測大鼠海馬組織Apaf-1 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　透射電鏡結(jié)果顯示:假手術(shù)組海馬 CA1區(qū)神經(jīng)元胞核較大,呈圓形或橢圓形,核膜清晰完整,常染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀均勻分布,胞漿內(nèi)可見豐富的細(xì)胞器。模型2 h組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元核膜凹陷,核染色質(zhì)密度增高,線粒體輕微腫脹;模型24 h組海馬CA1區(qū)神經(jīng)

5、元核膜皺縮嚴(yán)重,核仁物質(zhì)增多、偏移,線粒體結(jié)構(gòu)松散、空泡狀,線粒體嵴斷裂,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒;模型72 h組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元核固縮,核染色質(zhì)呈團(tuán)塊狀邊集于核膜下,線粒體不同程度脫空。黃芪注射液2 h組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元核膜較光滑,染色質(zhì)細(xì)小而分散,線粒體無明顯腫脹;黃芪注射液24 h組海馬 CAI區(qū)神經(jīng)元核皺縮改善,核膜較光滑,染色質(zhì)細(xì)小而分散,胞質(zhì)腫脹明顯改善;黃芪注射液72 h組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元核固縮不明顯,核膜較光滑,染色質(zhì)細(xì)小

6、而分散,胞質(zhì)腫脹有所改善。免疫組化、Western blot和RT-PCR結(jié)果顯示:除0 h和120 h外,模型組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)Apaf-1蛋白及mRNA表達(dá)均較假手術(shù)組增加(P<0.05);與模型組相比,黃芪注射液組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)Apaf-1蛋白及mRNA表達(dá)均顯著性減少(P<0.05),而黃芪注射液溶劑對照組各時(shí)間點(diǎn)與模型組相比則均無顯著性變化(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.腦缺血再灌注后大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元出現(xiàn)明顯的