小鼠自體皮膚成纖維細(xì)胞皮內(nèi)注射后存活情況的雙光子顯微鏡觀察及研究.pdf

1、目的：研究和建立較為理想的小鼠皮膚成纖維細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)、鑒定及注射移植的技術(shù)方法。通過雙光子顯微鏡觀察體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞皮內(nèi)注射移植后的長(zhǎng)期存活情況，了解膠原纖維等基質(zhì)成分的變化，為臨床應(yīng)用自體真皮成纖維細(xì)胞進(jìn)行軟組織填充的可行性提供可靠的理論基礎(chǔ)。 方法：用組織塊法對(duì)每只小鼠皮膚成纖維細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，消化加反復(fù)貼壁法純化細(xì)胞。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征，并作波形蛋白(vimentin)抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色及染

2、色體分析。生產(chǎn)EGFP慢病毒液，并用其轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞，倒置熒光顯微鏡下觀察EGFP的表達(dá)情況。將轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞注射移植到相應(yīng)來源的小鼠皮內(nèi)，生理鹽水作陰性對(duì)照。分別于注射1個(gè)月、2個(gè)月后取材，標(biāo)本行連續(xù)冰凍切片，用雙光子顯微鏡觀察細(xì)胞及膠原的變化，對(duì)膠原的分布面積比值和真皮厚度作圖象分析，并對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理。 結(jié)論： 1．組織塊培養(yǎng)法簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)，該法所獲得的成纖維細(xì)胞可在體外穩(wěn)定培養(yǎng)，為皮內(nèi)注射移植提供了