運用雙光子顯微鏡觀察甲潑尼龍對小鼠脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、目的：探討雙光子顯微鏡活體觀察甲潑尼龍(methylprednisolone, MP)對小鼠脊髓損傷治療效果的方法。背景:甲潑尼龍能通過其抗炎抗氧化等作用減輕脊髓損傷的繼發(fā)性損傷,但是甲潑尼龍對壓迫性脊髓損傷的軸突保護作用仍然不明確。本研究采用雙光子活體成像技術(shù)活體內(nèi)觀察甲潑尼龍對小鼠脊髓損傷治療效果的研究。
　　方法：36只成年雄性轉(zhuǎn)基因熒光小鼠,體重23~25 g,隨機分為假手術(shù)組(A組)、脊髓損傷組(B組)、MP治療組(C組

2、),每組12只。A組僅單純行椎板切除術(shù),不損傷脊髓;B、C組采用重物壓迫法建立 L1脊髓損傷模型,B組于傷后0.5、8、24 h靜脈注射生理鹽水,C組于傷后0.5、8、24 h靜脈注射MP(30 mg/kg)。各組術(shù)后1~7 d對小鼠進行后肢運動功能評分(Basso Mouse Scale評分);損傷前與損傷后0.5h、24h、48h、72 h用雙光子顯微鏡進行小鼠脊髓損傷區(qū)的活體神經(jīng)成像,觀察軸突壞死情況;術(shù)后7d取材行組織學切片,觀

3、察損傷部位的病理變化與小膠質(zhì)細胞侵潤情況。
　　結(jié)果：A組術(shù)后運動功能與術(shù)前無明顯差異,B、C組術(shù)后各時間點BMS評分均低于A組(P<0.05)。術(shù)后4 d內(nèi)B、C組小鼠后肢大多無關(guān)節(jié)活動,組間BMS評分比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);4 d后B、C組小鼠開始出現(xiàn)輕微的后肢關(guān)節(jié)活動,傷后7 d C組小鼠后肢頻繁出現(xiàn)足背步行或偶爾出現(xiàn)足拓步行,B組小鼠后肢僅有輕微的踝關(guān)節(jié)活動,術(shù)后7 d C組BMS評分高于B組(P<0.05)

4、。雙光子顯微鏡活體觀察示,A組各時間點軸突殘留率均為1,B、C組損傷后48h內(nèi)軸突殘留率進行性降低,傷后48h和72h C組軸突殘留率高于B組(P<0.05)。術(shù)后7 d組織學觀察顯示B組灰質(zhì)中出現(xiàn)大面積的壞死與空洞,與B組相比C組灰質(zhì)壞死程度有一定改善。C組的小膠質(zhì)細胞增值數(shù)目比B組低(P<0.05)
　　結(jié)論：雙光子顯微鏡能夠早期探測脊髓壓迫性損傷后軸突的動態(tài)變化。急性脊髓損傷早期應(yīng)用甲基強的松龍具有神經(jīng)保護作用,它能夠減輕脊