p53在KA受體介導(dǎo)的自噬激活中的作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：在體外培養(yǎng)的大鼠胎鼠的原代紋狀體神經(jīng)元中，研究p53在興奮性毒性KA介導(dǎo)的自噬激活中的作用及其機(jī)制。
　　 方法：采用培養(yǎng)大鼠胎鼠的原代紋狀體神經(jīng)元給藥法，建立海人藻酸(KinicAcid，KA)介導(dǎo)的神經(jīng)興奮性毒性的體外模型，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測模型神經(jīng)元的損傷；LDH法檢測神經(jīng)元的存活率；MDC觀察神經(jīng)興奮性毒性對神經(jīng)元自噬活性的影響；Western Blot和免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測自噬相關(guān)蛋白LC3、Beelin-1、P6

2、2蛋白的表達(dá)；LDH和免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測自噬抑制劑(3-methyladenine，3-MA)和p53抑制劑(Pifithrin-alpha,PFT-α)對興奮性毒性引起的神經(jīng)元損傷的影響。Westem Blot檢測3-MA和PFT-α對模型神經(jīng)元自噬相關(guān)蛋白LC3、P62、Beclin-1和凋亡相關(guān)蛋白p53、Bcl-2蛋白的表達(dá)影響。免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測3-MA和PFT-α對模型神經(jīng)元線粒體膜電位、鈣離子和自由基的變化。
　　

3、 結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)利用培養(yǎng)原代神經(jīng)元給藥法成功建立了大鼠胎鼠的原代紋狀體神經(jīng)元興奮性毒性的體外模型。免疫細(xì)胞化學(xué)和LDH結(jié)果證實(shí)了KA受體介導(dǎo)的興奮性毒性可引起神經(jīng)元損傷，并且呈一定的時(shí)間依賴性與劑量相關(guān)性。MDC和Western Blot結(jié)果顯示神經(jīng)興奮性毒性可以激活神經(jīng)元自噬活性。Western Blot結(jié)果顯示KA受體介導(dǎo)的興奮性毒性中P62、Bel-2蛋白表達(dá)下調(diào)，LC3、p53、Beclin-1蛋白表達(dá)上調(diào)；3-MA和PFT-α預(yù)