抑制結(jié)構(gòu)蛋白基因?qū)MMSCs體外向心肌細胞分化過程中收縮蛋白基因表達的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、 本文探討結(jié)構(gòu)蛋白即肌聯(lián)蛋白titin基因在骨髓間充質(zhì)干細胞(BMMSCs)體外向心肌細胞分化過程中的作用及其對收縮蛋白基因肌球蛋白重鏈的β亞單位(β-MHC)和肌鈣蛋白亞單位I(cTnI)基因表達的影響。本文在大鼠雙側(cè)股骨和脛骨的骨髓腔獲得細胞，貼壁篩選法純化BMMSCs并進行體外培養(yǎng)擴增。分別在誘導后1天、4天、7天、14天，顯微鏡下連續(xù)觀察其形態(tài)變化，同時將攜帶有針對大鼠titinN2B區(qū)的siRNA重組質(zhì)粒pSITITIN和

2、針對人β-actin的siRNA重組質(zhì)粒pSIACTIN,利用脂質(zhì)體將上述重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染入誘導后的BMMSCs，轉(zhuǎn)染后24小時，用Tripure提取各個時間點的RNA，半定量RT-PCR技術(shù)檢測各時間點干擾前后結(jié)構(gòu)蛋白titin基因和收縮蛋白β-MHC、cTnI基因在BMMSCs體外心肌細胞樣分化過程中的動態(tài)表達。結(jié)果：1.誘導前titin、β-MHC、cTnI基因都有弱的表達，誘導后表達增強。2.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染誘導后的BMMSCs，t

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