體外模擬心肌環(huán)境誘導骨髓間充質干細胞向心肌細胞分化的研究.pdf

1、目的: 體外模擬心肌環(huán)境，誘導骨髓間充質干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向心肌細胞分化，觀察其誘導作用，同時與5-氮雜胞苷(5-azacytidine,5-aza)的誘導作用進行比較。 方法: 自成年Wister大鼠的骨髓分離MSCs，新生Wister乳鼠分離心肌細胞并制備心肌細胞凍融液作為培養(yǎng)基體外模擬心肌環(huán)境，分四組培養(yǎng)MSCs。A組為對照組即用普通培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞；B組為5-a

2、za組；C組為心肌細胞凍融液與5-aza共同培養(yǎng)；D組為心肌細胞凍融液培養(yǎng)。觀察細胞形態(tài)變化，利用免疫細胞化學技術鑒定心肌特異性蛋白 T(Troponin T，cTnT)，連接蛋白43(Connexin43)，a-橫紋肌動蛋白(a-Sarcomeric Actin)，CD31的表達情況。在光鏡下隨機選擇8個非重疊視野，圖像分析分別計算陽性細胞所占比例。數(shù)據采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，測量數(shù)據以均數(shù)±標準差(￣x±s)表示，作成組比較t

3、檢驗。P<0.05有統(tǒng)計學意義。 結果: ①體外模擬心肌微環(huán)境情況：培養(yǎng)7d時心肌細胞形成細胞簇或細胞單層，呈放射狀排列的同心圓狀或峰谷樣生長，細胞簇搏動呈明顯同步性。傳代后的心肌細胞仍具有自主收縮的特性。 ②骨髓間充質干細胞的體外誘導結果：誘導處理1周后，5-氮雜胞苷組多數(shù)細胞呈桿狀，緊密平行排列生長，細胞體積變大，可見肌絲樣結構形成；心肌細胞凍融液組細胞有聚集生長趨勢，形成大量的子細胞，可見大量的肌絲樣的結構

4、；5-氮雜胞苷+心肌細胞凍融液組脫落或降解的細胞數(shù)明顯少于5-氮雜胞苷組，也形成肌絲樣結構，但部分細胞內有脂肪空泡形成。 ③免疫細胞化學鑒定結果：誘導培養(yǎng)1周后，血清對照組僅表達α-橫紋肌肌動蛋白；5-氮雜胞苷組表達心肌特異性蛋白T、α-橫紋肌肌動蛋白、連接蛋白43，其陽性率分別為20％，28％，25％，抗CD31染色呈陰性；心肌細胞凍融液組上述蛋白表達陽性率分別為23％，32％，28％，明顯高于5-氮雜胞苷組與5-氮雜胞苷+心

5、肌細胞凍融液組(P<0.05)，同時抗CD31染色呈陽性；5-氮雜胞苷+心肌細胞凍融液組上述蛋白表達陽性率分別為21％，28％，24％，與5-氮雜胞苷組相比無明顯差異(P>0.05)，同時抗CD31染色呈陽性 結論: ①以心肌細胞凍融液體外模擬心肌微環(huán)境，可高效誘導骨髓間充質干細胞分化為心肌細胞。 ②部分骨髓間充質干細胞表達CD31，即可向血管內皮細胞分化，提示與5-氮雜胞苷單一的肌細胞誘導作用相比，心肌細胞凍融