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文檔簡介
1、目的:研究在低氧高二氧化碳情況下,肺動脈平滑肌細胞線粒體途徑凋亡與肺動脈重構(gòu)的關系及葛根素的影響。 方法:將SPF級雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,體重180~210g,隨機分為正常對照組(N組),慢性低O2高CO22周組(H2w組),慢性低O2高CO24周組(H4w組),慢性低O2高CO24周+葛根素組(H4w+G組),每組10只。慢性低O2高CO2組置于常壓低氧高二氧化碳艙內(nèi),充入N2使O2濃度維持在8.
2、5%~11%,CO2濃度維持在5.0%~6.5%。艙內(nèi)水蒸氣用無水CaCl2吸收,每天8h,每周6d,連續(xù)2w或4w。慢性低O2高CO24周+葛根素組,每次低O2高CO2前半小時腹腔注射葛根素(50mg/kg體重),其它條件同H4w組。實驗2w和4w后,大鼠腹腔麻醉,采用右心導管法測肺動脈平均壓(mPAP),頸總動脈插管測頸動脈平均壓(mCAP),分別稱取右室(RV)和左室+室間隔(LV+S)的重量,以RV/(LV+S)重量比來反映右心
3、室重量的變化。光鏡下測定肺動脈中膜厚度(PAMT),免疫組化法(anti-α-actin)測定肺動脈管壁α-actin含量,反映肺血管重建情況;TUNEL法計算肺動脈平滑肌細胞凋亡指數(shù);免疫組化法計算肺動脈平滑肌細胞增殖指數(shù)(anti-PCNA)、胞漿線粒體Cyt-c釋放量,胞漿Bcl-2蛋白、Bax蛋白含量;分光光度法檢測肺組織勻漿Caspase9、Caspase3酶活性。 結(jié)果: 1、H2w組、H4w組mPAP、RV
4、/(LV+S)、PAMT顯著高于正常N組(P<0.01);H4w+G組mPAP、RV/(LV+S)、PAMT‘顯著低于H4w組(P<0.01);4組mCAP比較無顯著性差異(P>0.05)。 2、H2w組、H4w組各級肺動脈管壁α-actin含量顯著高于正常組(P<0.01),H4w組高于H2w組;H4w+G組大鼠肺彈力型動脈α-actin含量顯著低于于H4w組相應直徑肺動脈(P<0.01;H4w+G組大鼠肺肌型動脈和肺微細動脈
5、管壁α-actin含量與H4w組相應直徑肺動脈比較無顯著差異(P>0.05)。 3、H2w組、H4w組大鼠各級肺動脈平滑肌細胞凋亡指數(shù)較N組顯著下降(P<0.05);H4w+G組大鼠肺彈力型動脈和肌型動脈平滑肌細胞凋亡指數(shù)較H4w組相應直徑肺動脈顯著升高(P<0.05);兩組間肺微細動脈平滑肌細胞凋亡指數(shù)無顯著性差異(P>0.05)。 H2w組、H4w組大鼠各級肺動脈平滑肌細胞增殖指數(shù)顯著高于N組(P<0.01);H4w
6、+G組大鼠各級肺動脈平滑肌細胞增殖指數(shù)與H4w組比較無顯著差異(P>0.05)。 4、H2w組、H4w組大鼠各級肺動脈平滑肌細胞胞漿線粒體cyt-c釋放量顯著低于正常組(P<0.01);H4w+G組大鼠各級肺動脈平滑肌細胞漿線粒體Cyt-c釋放量顯著高于H4w組(P<0.01),但顯著低于N組(P<0.01)。 5、H2w組、H4w組大鼠各級肺動脈平滑肌細胞胞漿Bcl-2含量顯著高于于N組(P<0.01),Bax含量顯著
7、低于N組(P<0.01),Bcl-2/Bax高于N組。 H4w+G組大鼠肺彈力型動脈和肺微細動脈平滑肌細胞胞漿Bcl-2含量顯著低于H4w組(P<0.01),兩組間在肺肌型動脈平滑肌細胞未見顯著性差異(P>0.05);Bax含量在H4w+G組與H4w組間各級肺動脈平滑肌細胞胞漿未見顯著性差異。 6、H2w組、H4w組大鼠肺組織勻漿Caspase9酶活性顯著低于N組(P<0.01);H4w+G組大鼠肺組織勻漿Caspase
8、9酶活性顯著高于H4w組(P<0.01)。 H2w組、H4w組大鼠肺組織勻漿Caspase3酶活性顯著低于N組(P<0.01);H4w+G組大鼠肺組織勻漿Caspase3酶活性顯著高于H4w組(P<0.01)。 結(jié)論: 1、肺動脈平滑肌細胞線粒體途徑細胞凋亡減少可能在低氧高二氧化碳所致肺動脈高壓肺動脈平滑肌層重構(gòu)中起重要作用。 2、肺動脈平滑肌細胞胞漿Bcl-2蛋白和Bax蛋白相對含量變化可能是導致該途徑
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