益氣溫陽活血化痰方對低氧高二氧化碳性肺動脈高壓大鼠ERS通路的調(diào)控作用.pdf

1、目的：⑴觀察低氧高二氧化碳性肺動脈高壓大鼠的肺血管重塑；⑵研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在大鼠低氧高二氧化碳性肺動脈高壓中的作用；⑶研究益氣溫陽活血化痰方（YWHHF）對大鼠低氧高二氧化碳性肺動脈高壓的干預(yù)作用及機(jī)制。
　　方法：①以健康雄性清潔級SD大鼠為研究對象。隨機(jī)分為四組，每組十只：常氧對照組（ N）、低氧高二氧化碳組（ HH）、ERS通路抑制劑4-苯基丁酸(4-phenylbutyricacid)組(4-PBA)、ERS通路激動劑衣霉素

2、（Tunicamycin）組（ TM）。N組置于常氧環(huán)境中飼養(yǎng),其余三組置于低氧高二氧化碳氧艙中（9％-11%O2、5%-6%CO2）飼養(yǎng)；艙內(nèi)水蒸汽用無水CaCl2吸收，多余CO2用氫氧化鈉吸收，每天8小時，每周6天，飼養(yǎng)4周。②在體模型復(fù)制成功指標(biāo)檢測：采用右心導(dǎo)管法測量各組造模大鼠的肺動脈平均壓，頸動脈平均壓，右心室肥大指數(shù)測定；③其他指標(biāo)檢測：采用HE染色法觀察肺組織及肺中小動脈病理形態(tài)；電鏡觀察肺小動脈及細(xì)胞器的超微結(jié)構(gòu)；采用

3、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blotting）分別檢測各組大鼠ERS相關(guān)蛋白及mRNA（GRP78、CHOP、JNK、Caspase-12）的表達(dá)；免疫熒光α-SMA標(biāo)記法鑒定各組肺中小動脈平滑肌細(xì)胞；原位末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測各組肺動脈平滑肌細(xì)胞的凋亡指數(shù)。④以健康雄性清潔級SD大鼠為研究對象。隨機(jī)分為五組，每組十只：常氧對照組（N）、低氧高二氧化碳組（HH）、益氣溫陽活血化痰方高劑量

4、組（YH）、中劑量組（YM）、小劑量組（YL）。N組置于常氧環(huán)境中飼養(yǎng),其余四組置于低氧高二氧化碳氧艙中（9%-11%O2、5%-6%CO2）飼養(yǎng)；艙內(nèi)水蒸汽用無水 CaCl2吸收，多余CO2用氫氧化鈉吸收，每天8小時，每周6天，飼養(yǎng)4周。b)余步驟同方法一。
　　結(jié)果：⑴較N組相比，HH組、4-PBA組、TM組肺動脈平均壓升高（P＜0.01）；ERS相關(guān)蛋白及mRNA（GRP78、JNK、Caspase-12、 CHOP）的表達(dá)

5、均不同程度升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖致中膜層不同程度增厚，WA/TA增大（P＜0.01），LA/TA減?。≒＜0.01），肺動脈平滑肌細(xì)胞凋亡率減少；電鏡觀察肺小動脈超微結(jié)構(gòu)均發(fā)生不同程度的病理改變。⑵較HH組相比，4-PBA組肺動脈平均壓降低（P＜0.01）；ERS相關(guān)蛋白及mRNA（GRP78、JNK、Caspase-12、CHOP）的表達(dá)不同程度降低；肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖被抑制，WA/TA減?。≒＜0.01），

6、LA/TA增大（P＜0.01），肺動脈平滑肌細(xì)胞凋亡率增加（P＜0.05）。⑶較HH組相比，TM組肺動脈平均壓升高（P＜0.05），ERS相關(guān)蛋白及mRNA的表達(dá)不同程度升高，肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖明顯致WA/TA增大（P＜0.01）， LA/TA減小（P＜0.01），肺動脈平滑肌細(xì)胞凋亡率減少（P＜0.01）。⑷較N組相比，HH組、YH組、YM組、YL組肺動脈平均壓均升高（P＜0.01）；ERS相關(guān)蛋白及mRNA（GRP78、JNK、C

7、aspase-12、CHOP）的表達(dá)均不同程度升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖致中膜層不同程度增厚，WA/TA增大（P＜0.01），LA/TA減小（P＜0.01），肺動脈平滑肌細(xì)胞凋亡率均減少；電鏡觀察肺小動脈超微結(jié)構(gòu)均發(fā)生不同程度的病理改變。⑸較HH組相比，YH組、YM組、YL組肺動脈平均壓降低（P＜0.01）；ERS相關(guān)蛋白及mRNA的表達(dá)不同程度降低，肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖被不同程度抑制，WA/TA減小，LA/TA增大

8、，其中YH組和YM組P＜0.01，YL組P＜0.05肺動脈平滑肌細(xì)胞凋亡率均增加。⑹較YL組相比，YH組、YM組肺動脈平均壓降低（P＜0.05），ERS相關(guān)蛋白及mRNA的表達(dá)均降低（P＜0.05），肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖減少，WA/TA減?。≒＜0.01），LA/TA增大（P＜0.01），肺動脈平滑肌細(xì)胞凋亡率均增加（P＜0.05）。⑺YH組和YM組之間各數(shù)據(jù)差異不大，差值無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：①低氧高二氧化碳