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文檔簡介
1、【研究背景】脈絡膜新生血管(CNV)是許多視網(wǎng)膜和脈絡膜疾病的共同病理表現(xiàn),常見CNV疾病包括年齡相關性黃斑變性(AMD)、特發(fā)性脈絡膜新生血管、眼組織胞漿菌病綜合征(POHS),以及眼底血管樣條紋(AS)、病理性近視和外傷性脈絡膜破裂等。新生血管從脈絡膜長出后突破Bruch膜后長入視網(wǎng)膜色素上皮下間隙或神經(jīng)上皮下,由于新生血管是不成熟的,易發(fā)生出血和滲漏等改變,繼而形成瘢痕,造成局部損傷,這些損傷好發(fā)于黃斑區(qū),對中心視力影響較大,因此
2、CNV是造成視力喪失的重要原因之一。CNV的發(fā)生和發(fā)展是復雜的過程,受多種因素和因子精細而敏感的調(diào)控。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是目前已知的最強促血管生成因子,能夠誘導新生血管生成并使血管通透性增高??筕EGF治療也是目前主流的CNV治療方式。本研究組已證實Notch信號通路同樣在CNV的生成中起重要作用,Notch信號通路中的Delta樣配體4(Dll4)基因是除VEGF外目前發(fā)現(xiàn)的另一可因半劑量等位基因缺失而使動物在胚胎時期死亡的
3、基因,Dll4在血管的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。探討Dll4在CNV的發(fā)生中可能的作用及其機制,可以為臨床防治CNV相關疾病提供新的思路。
【目的】探討Notch信號通路中Dll4在激光誘導的大鼠脈絡膜新生血管生成中的作用機制。
【方法】將120只BN大鼠隨機分為正常組(18只)、光凝組(54只)、光凝后實驗組(24只)和光凝后對照組(24只)。532nm激光誘導建立雙眼CNV模型。實驗組在光凝后立刻玻璃體內(nèi)注射25mg
4、.mL-1的VEGF抗體Avastin10μL,對照組在光凝后注射0.01mmol.L-1PBS10μL。采用免疫熒光染色法檢測7d時Dll4和VEGF在正常組(6只)和光凝組(6只)CNV中的表達。采用Western-blotting和RT-PCR方法檢測正常組(12只)和光凝后1d(12只)、3d(12只)、7d(12只)和14d(12只)組CNV中Dll4和VEGF的蛋白和mRNA表達趨勢。7d時采用Westernblotting
5、和RT-PCR檢測實驗組(12只)和對照組(12只)CNV中Dll4和VEGF蛋白及mRNA表達含量的差異,14d時通過組織切片HE染色和脈絡膜鋪片法檢測實驗組(12只)和對照組(12只)CNV生成的厚度和面積。
【結(jié)果】Dll4和VEGF在CNV區(qū)域有共表達。Dll4和VEGF蛋白和mRNA的表達趨勢一致,均在第一天表達開始上升,第7天時達到高峰,第14天時開始下降。玻璃體內(nèi)注射Avastin后,VEGF和Dll4表達均下降
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