Notch-Dll4在激光誘導的大鼠脈絡膜新生血管中的作用.pdf

1、【研究背景】脈絡膜新生血管（CNV）是許多視網(wǎng)膜和脈絡膜疾病的共同病理表現(xiàn)，常見CNV疾病包括年齡相關性黃斑變性（AMD）、特發(fā)性脈絡膜新生血管、眼組織胞漿菌病綜合征（POHS），以及眼底血管樣條紋（AS）、病理性近視和外傷性脈絡膜破裂等。新生血管從脈絡膜長出后突破Bruch膜后長入視網(wǎng)膜色素上皮下間隙或神經(jīng)上皮下，由于新生血管是不成熟的，易發(fā)生出血和滲漏等改變，繼而形成瘢痕，造成局部損傷，這些損傷好發(fā)于黃斑區(qū)，對中心視力影響較大，因此

2、CNV是造成視力喪失的重要原因之一。CNV的發(fā)生和發(fā)展是復雜的過程，受多種因素和因子精細而敏感的調(diào)控。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是目前已知的最強促血管生成因子，能夠誘導新生血管生成并使血管通透性增高?？筕EGF治療也是目前主流的CNV治療方式。本研究組已證實Notch信號通路同樣在CNV的生成中起重要作用，Notch信號通路中的Delta樣配體4（Dll4）基因是除VEGF外目前發(fā)現(xiàn)的另一可因半劑量等位基因缺失而使動物在胚胎時期死亡的

3、基因，Dll4在血管的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。探討Dll4在CNV的發(fā)生中可能的作用及其機制，可以為臨床防治CNV相關疾病提供新的思路。
　　【目的】探討Notch信號通路中Dll4在激光誘導的大鼠脈絡膜新生血管生成中的作用機制。
　　【方法】將120只BN大鼠隨機分為正常組（18只）、光凝組（54只）、光凝后實驗組（24只）和光凝后對照組（24只）。532nm激光誘導建立雙眼CNV模型。實驗組在光凝后立刻玻璃體內(nèi)注射25mg

4、.mL-1的VEGF抗體Avastin10μL，對照組在光凝后注射0.01mmol.L-1PBS10μL。采用免疫熒光染色法檢測7d時Dll4和VEGF在正常組（6只）和光凝組（6只）CNV中的表達。采用Western-blotting和RT-PCR方法檢測正常組（12只）和光凝后1d（12只）、3d（12只）、7d（12只）和14d（12只）組CNV中Dll4和VEGF的蛋白和mRNA表達趨勢。7d時采用Westernblotting

5、和RT-PCR檢測實驗組（12只）和對照組（12只）CNV中Dll4和VEGF蛋白及mRNA表達含量的差異，14d時通過組織切片HE染色和脈絡膜鋪片法檢測實驗組（12只）和對照組（12只）CNV生成的厚度和面積。
　　【結(jié)果】Dll4和VEGF在CNV區(qū)域有共表達。Dll4和VEGF蛋白和mRNA的表達趨勢一致，均在第一天表達開始上升，第7天時達到高峰，第14天時開始下降。玻璃體內(nèi)注射Avastin后，VEGF和Dll4表達均下降