蛋氨酸亞砜還原酶B1在糖尿病小鼠腎臟中的表達(dá)及與氧化應(yīng)激的關(guān)系.pdf

1、背景和目的:
　　隨著糖尿病發(fā)病率的不斷升高，糖尿病及其并發(fā)癥也更加嚴(yán)重地威脅著人類的健康和生存。已有大量的研究顯示糖尿病引起的腎臟損害與氧化應(yīng)激密切相關(guān)。蛋氨酸(Met)是生物體內(nèi)最容易被氧化的氨基酸之一，活性氧簇(ROS)能將Met氧化為蛋氨酸亞砜(MetO)，引起多種生物學(xué)功能發(fā)生改變，從而給細(xì)胞帶來致命性的損傷。蛋氨酸亞砜還原酶(Msrs)可逆轉(zhuǎn)這種氧化，起到修復(fù)的作用。哺乳動物Msrs分為兩種亞型—MsrA和MsrB。編

2、碼MsrA的只有一個基因，而編碼MsrB的有三個基因，即MsrB1，MsrB2和MsrB3。MsrB1是其中唯一一個能編碼含硒的蛋白質(zhì)的基因，它在修復(fù)蛋白損傷方面具有獨(dú)特的作用。已有研究表明MsrB1的表達(dá)變化與衰老、神經(jīng)變性疾病、白內(nèi)障、癌癥等許多疾病相關(guān)，但它在糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展中的變化和作用尚未見報(bào)道。本課題探討鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病小鼠腎組織MsrB1的表達(dá)變化及其與氧化應(yīng)激的關(guān)系。
　　方法:
　　本文以

3、STZ和單側(cè)腎切除處理的C57BL/6小鼠為研究對象，將10周齡雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為4組:正常對照組(NC組，n=12)、單側(cè)腎切除組(UX組，n=12)、STZ組(n=12)和單側(cè)腎切除加STZ組（STZ-UX組，n=14）。模型制備后的第8周末，采集標(biāo)本，檢測生理生化指標(biāo);通過高碘酸-希夫(PAS)和馬松(Masson)染色，觀察小鼠腎臟病理變化;通過免疫組化法檢測MsrB1在腎組織中的表達(dá)和分布情況;通過實(shí)時定量PCR和

4、western blotting分別檢測MsrB1的mRNA和蛋白水平的變化;通過丙二醛(MDA)、蛋白羰基(PC)和總巰基(TSH)測試盒檢測各組腎臟氧化應(yīng)激情況;采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　1.生理生化指標(biāo)及腎臟病理證明STZ組和STZ-UX組小鼠發(fā)生了糖尿病腎臟損害，且STZ-UX組更為嚴(yán)重。
　　2.腎臟免疫組化顯示MsrB1特異性地分布于腎小管，腎小球中并無MsrB1分布

5、。在NC組小鼠的腎臟中，MsrB1廣泛表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞漿中;與之相比，STZ組分布稍有減少(P＜0.05)，STZ-UX組分布明顯減少（P＜0.01），而UX組分布未見明顯變化（P＞0.05）。
　　3.實(shí)時定量PCR和western blotting檢測MsrB1的結(jié)果表明:與NC組相比，STZ組和STZ-UX組MsrB1 mRNA和蛋白水平降低(P＜0.05，P＜0.01)，且STZ-UX組降低更明顯，而UX

6、組未見明顯變化(P＞0.05)。
　　4.各組小鼠腎臟氧化應(yīng)激水平:與NC組相比，STZ組和STZ-UX組的MDA、PC水平升高（P＜0.05，P＜0.01），TSH水平降低(P＜0.05)，且STZ-UX組變化更明顯，而UX組未見明顯變化（P＞0.05）。
　　5.相關(guān)性分析證明STZ組和STZ-UX組MsrB1蛋白表達(dá)與MDA和PC呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，與TSH含量呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　結(jié)論: