組蛋白脫乙?；敢种苿?1r對(duì)氯化鋰-匹魯卡品致癇大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用.pdf

1、癲癇是最常見的嚴(yán)重的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一，給患者、家庭、社會(huì)造成了沉重負(fù)擔(dān)，它影響全球約6500萬人。我國約有900萬人受其危害，且約25％-30％被診斷為難治性癲癇。其中，顳葉癲癇(temporal lobe epilepsy, TLE)為該類型中最常見的。氯化鋰-匹魯卡品誘發(fā)癲癇大鼠的行為學(xué)及海馬神經(jīng)元的病理學(xué)的改變跟人類的顳葉癲癇極為相似，故此模型在當(dāng)前的癲癇持續(xù)狀態(tài)（status epilepticus，SE）和TLE的相關(guān)研究

2、中被廣泛使用。在過去的十年中，雖然關(guān)于影響癲癇預(yù)后的病理生理機(jī)制和因素的研究已經(jīng)有了很大的進(jìn)展，但是對(duì)于其確切的發(fā)病機(jī)制仍未研究透徹，因此雖然有一部分癲癇患者能夠被治愈，卻尚有約三分之一的患者表現(xiàn)出耐藥性。因此深一步研究關(guān)于癲癇的確切發(fā)病機(jī)制、探索新型高效神經(jīng)保護(hù)藥物的意義重大。
　　組蛋白有多種共價(jià)修飾的方式，其中乙?；揎棡榛蜣D(zhuǎn)錄調(diào)控中的重要機(jī)制之一。組蛋白乙酰化的狀態(tài)主要由組蛋白乙?；?histone acetylase

3、s，HATs)和組蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylases，HDACs)調(diào)節(jié)。HATs主要是促進(jìn)蛋白乙酰化提高基因轉(zhuǎn)錄活性;而HDACs可使組蛋白脫乙?；?，抑制基因表達(dá)。組蛋白的乙?；?、脫乙?；胶獾母淖儠?huì)影響著細(xì)胞多方面的功能。近年不少研究證實(shí)了HDAC抑制劑在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病如缺血性中風(fēng)模型、亨廷頓氏病、多發(fā)性硬化癥的積極作用。然而目前HDAC抑制劑在癲癇領(lǐng)域的應(yīng)用還較少，尤其一些高效的新型HDAC抑制劑的應(yīng)用研究更

4、少。HDACs抑制劑11r，一個(gè)新的N-羥基肉桂酰胺基衍生物，在Medicinal chemistry上被李曉陽等人第一次進(jìn)行報(bào)道，且被證明是高效的HDAC1/3的選擇性抑制劑，并對(duì)多種腫瘤細(xì)胞系的生長有著明顯的抑制作用。目前尚缺乏關(guān)于其對(duì)于癲癇所致腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用的研究。因此，本課題建立氯化鋰-匹魯卡品誘發(fā)的癲癇大鼠模型，從而觀察SE后各組大鼠的行為學(xué)改變和大鼠海馬CA1及CA3區(qū)腦組織形態(tài)學(xué)改變情況、神經(jīng)元存活情況;檢測(cè)大鼠海馬

5、CA1及CA3區(qū)組蛋白乙酰化水平;并通過Morris水迷宮來評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)大鼠的認(rèn)知功能，以探討新型HDAC抑制劑11r對(duì)匹魯卡品誘發(fā)癲癇持續(xù)狀態(tài)所致腦損傷是否具有保護(hù)作用。本研究分為兩個(gè)部分:
　　第一部分 氯化鋰-匹魯卡品大鼠癲癇模型的建立及大鼠海馬神經(jīng)元病理學(xué)改變的觀察
　　目的：
　　觀察氯化鋰-匹魯卡品誘發(fā)癲癇大鼠的行為學(xué)變化及癲癇導(dǎo)致的海馬組織的病理改變情況。
　　方法：
　　成年體健雄性Spragu

6、e Dawley大鼠，通過腹腔注射氯化鋰-匹魯卡品誘發(fā)SE，從而觀察大鼠的行為學(xué)改變情況。SE后約60分鐘，通過腹腔注射地西泮來終止SE。致癇后24小時(shí)，對(duì)大鼠進(jìn)行灌注取腦，制備石蠟切片，用HE、Nissl染色來觀察各實(shí)驗(yàn)大鼠海馬神經(jīng)元的病理改變情況。
　　結(jié)果：
　　1.依據(jù)Racine評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)到Ⅳ及以上發(fā)作者，被定義為SE誘發(fā)成功。SE的表現(xiàn)為:雙側(cè)前肢陣攣、雙側(cè)后肢強(qiáng)直，身體背曲強(qiáng)直伴有直立、跌倒等。氯化鋰-匹魯卡

7、品致癇的成功率為90.0％;平均潛伏期為36.3±10.8min;72 h內(nèi)的死亡率為13.0％。
　　2.HE染色及Nissl染色結(jié)果:正常組大鼠的海馬CA1和CA3區(qū):見大量、致密的錐體及顆粒細(xì)胞，細(xì)胞排列緊密，且胞漿內(nèi)的尼氏小體豐富，胞核為圓形、橢圓形，核仁清晰，染色質(zhì)的分布均勻。SE后24 h，大鼠海馬CA1、CA3區(qū)的神經(jīng)元出現(xiàn)排列紊亂，細(xì)胞腫脹、破裂，細(xì)胞輪廓變模糊;變性、壞死神經(jīng)元呈現(xiàn)為三角形，胞漿內(nèi)的尼氏小體減少，

8、核固縮。
　　結(jié)論：
　　結(jié)果證實(shí):氯化鋰-匹魯卡品可成功誘發(fā)大鼠的癲癇發(fā)作，并導(dǎo)致大鼠海馬神經(jīng)元的變性、損傷。
　　第二部分 組蛋白脫乙?；敢种苿?1r對(duì)氯化鋰-匹魯卡品致癇大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用及其可能機(jī)制
　　目的：
　　研究新型HDAC抑制劑11r對(duì)氯化鋰-匹魯卡品誘發(fā)癲癇大鼠的海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用，并觀察11r對(duì)SE后海馬CA1、CA3區(qū)組蛋白乙?；降挠绊?，探討11r潛在的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。<

9、br>　　方法：
　　60只成年Sprague Dawley大鼠隨機(jī)分為5組（每組12只）:對(duì)照組、匹魯卡品組、治療Ⅰ組、治療Ⅱ組、11r預(yù)處理組。觀察各組大鼠行為學(xué)差異; SE后72小時(shí)Nissl染色計(jì)量大鼠海馬神經(jīng)元CA1及CA3區(qū)神經(jīng)元存活數(shù)，免疫組織化學(xué)法測(cè)定大鼠海馬CA1及CA3區(qū)組蛋白乙?；?SE后11天，Morris水迷宮測(cè)定大鼠的認(rèn)知功能。
　　結(jié)果：
　　1.行為學(xué)觀察:與匹魯卡品組相比，11r預(yù)

10、處理可延緩匹魯卡品誘導(dǎo)的SE發(fā)作潛伏期(P＜0.05)，并能降低死亡率(P＜0.05)，對(duì)照組未出現(xiàn)癲癇發(fā)作。
　　2.Nissl染色結(jié)果:對(duì)照組:大鼠海馬Ca(1)、CA3區(qū)見致密的錐體、顆粒細(xì)胞，胞漿內(nèi)的尼氏小體豐富。匹魯卡品組海馬CA1、和CA3區(qū)神經(jīng)元變性壞死，胞漿內(nèi)尼氏小體減少。治療Ⅰ組及治療Ⅱ組的錐體細(xì)胞存活數(shù)要明顯高于匹魯卡品組(P＜0.05)，但治療Ⅰ組及治療Ⅱ組之間的差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。11r預(yù)處

11、理組的錐體細(xì)胞存活數(shù)目要高于匹魯卡品組(P＜0.05)。說明11r預(yù)處理對(duì)于癲癇導(dǎo)致的神經(jīng)元損傷有一定的保護(hù)作用。
　　3.免疫組織化學(xué)方法結(jié)果:免疫標(biāo)記物質(zhì)呈藍(lán)灰色，存在于細(xì)胞核內(nèi)。匹魯卡品組的陽性細(xì)胞數(shù)明顯低于治療Ⅰ組及治療Ⅱ組和11r預(yù)處理組，即其組蛋白乙酰化水平低于這三組(P＜0.05)，陰性對(duì)照無免疫染色。
　　4.Morris水迷宮結(jié)果:與對(duì)照組、11r預(yù)處理組、治療Ⅰ、Ⅱ組比較，匹魯卡品組的逃避潛伏期均出現(xiàn)明顯