探討組蛋白去乙?；敢种苿θ橄侔┘癊Rα表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景：調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，全球每年120萬婦女罹患乳腺癌，且有50萬死于該病。在西歐、北美等發(fā)達(dá)國家，乳腺癌的發(fā)病率占女性惡性腫瘤首位。隨著我國生活水平的提高和環(huán)境、生活方式的改變，我國乳腺癌的患病率呈現(xiàn)明顯的增長趨勢。2000年全國腫瘤防治辦公室發(fā)表了1988到1992年的調(diào)查報(bào)告，我國城市發(fā)病率明顯高于農(nóng)村，上海乳腺癌發(fā)病率逐年升高，已占當(dāng)?shù)嘏詯盒阅[瘤首位。隨著人們對各期乳腺癌許多大規(guī)模前瞻性臨床研究以及乳腺癌生物學(xué)性的不斷認(rèn)識，其

2、治療模式也發(fā)生了根本性改變。由以往單純局部治療轉(zhuǎn)入局部與全身相結(jié)合的綜合治療時(shí)代。 研究資料提示，雌激素是乳腺癌重要的有絲分裂刺激劑，它的這種促分裂作用通過乳腺組織中的雌激素受體(ER)介導(dǎo)，ERα陽性成為乳腺癌患者抗雌激素治療即內(nèi)分泌治療的依據(jù)。雌激素受體陽性的病人對內(nèi)分泌治療效果顯著好于雌激素受體陰性的病人，但是有1/3以上的乳腺癌病人在診斷出乳腺癌的時(shí)候，其雌激素受體-α(ER-α)為陰性，還有一部分雌激素受體陽性的病人在

3、治療過程中，ER-α轉(zhuǎn)陰性。此類病人不適合行內(nèi)分泌治療，預(yù)后也較差。最近的研究表明，DNMT1和HDAC分別為甲基化和乙?；閷?dǎo)的導(dǎo)致ERα基因沉默的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑。由于DNMT1和HDAC的作用，使DNA甲基化以及組蛋白去乙?；?，導(dǎo)致DNA沉默，造成了部分乳腺癌患者的ERα表達(dá)缺失。組蛋白的乙?；揎椩诨虻霓D(zhuǎn)錄調(diào)控中起著非常重要的作用[5]?；蛴行虻霓D(zhuǎn)錄調(diào)控是機(jī)體細(xì)胞維持正常功能的前提，如果基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能紊亂，細(xì)胞可以發(fā)生癌變。HD

4、AC抑制劑主要的作用機(jī)制是通過抑制HDAC，阻斷由于HDAC募集功能紊亂而導(dǎo)致的基因表達(dá)受抑，從而治療癌癥。 目的： 1.在mRNA水平研究乳腺癌和乳腺纖維瘤中ERα的表達(dá)，及與其他臨床因素的關(guān)系。 2.觀察去乙?；敢种苿?MS-275)對乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231和MCF-7中ERαmRNA表達(dá)水平的影響。 3.觀察去乙?；敢种苿?MS-275)對乳腺癌細(xì)胞株增殖，調(diào)亡的影響。 方法：

5、 1.抽取組織總RNA，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測27例乳腺癌和15例乳腺纖維瘤組織中ERαmRNA的表達(dá)，分析其關(guān)系。 2.以MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌細(xì)胞株為研究對象，以1.0umol/L,MS-275作用于細(xì)胞48小時(shí)，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測用藥前后乳腺癌細(xì)胞中ERα表達(dá)水平的變化3.以MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌細(xì)胞株為研究對象，設(shè)定非藥物

6、處理組和MS-275不同的濃度梯度作用于細(xì)胞，進(jìn)行MTT試驗(yàn)，并得出對癌細(xì)胞的生長抑制曲線。并采用流式細(xì)胞儀研究以1.0umol/LMS-275作用于細(xì)胞48小時(shí)后，兩種乳腺癌細(xì)胞株的生物學(xué)行為的變化。 結(jié)果： 1.乳腺癌癌組織ERαmRNA(與內(nèi)參比值)為0.60±0.44，較乳腺纖維瘤組織的0.26±0.16明顯降低(P<0.05)；但是ERαmRNA在乳腺癌及乳腺纖維腺瘤兩種組織中的總表達(dá)率差異無顯著性(p>0.0

7、5)。另外，ERα的表達(dá)率與月經(jīng)及年齡情況無關(guān)，在不同的臨床分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中其表達(dá)率存在顯著性差異(p<0.05)。 2.在1.0umol/L濃度MS-275作用48小時(shí)后，MDA-MB-231恢復(fù)表達(dá)ERα，非雌激素受體依賴的MDA-MB-231，未用藥物干預(yù)之前不表達(dá)ER-α，藥物處理后ER-α出現(xiàn)表達(dá)，其表達(dá)的平均水平為0.32±0.11，p<0.05。MCF-7未經(jīng)藥物干預(yù)時(shí)表達(dá)ERα平均表達(dá)水平0.52±0

8、.44，藥物處理后平均表達(dá)水平0.76±0.53，較未經(jīng)藥物處理的細(xì)胞明顯升高(p<0.05) 。 3.MS-275顯著抑制乳腺腫瘤細(xì)胞的生長。MTT檢測結(jié)果顯示，MS-275對細(xì)胞的抑制率隨濃度和作用時(shí)間的增加而呈明顯上升趨勢，與陰性對照組相比有顯著性差異(p>0.05)。流式細(xì)胞檢測顯示MS-275作為抗腫瘤藥物，影響細(xì)胞的增殖一可以使乳腺癌細(xì)胞的增殖停滯在G1/S期和G2/M期，和陰性對照組及DMSO(MS-275的溶媒)