新型組蛋白去乙?；敢种苿?duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用.pdf

1、組蛋白去乙?；敢种苿?Histone deacetylase inhibitor,HDACi),是近年來出現(xiàn)的一類新型抗腫瘤藥物,因其在抗腫瘤方面具有低毒高效的特點(diǎn),已成為腫瘤臨床藥物治療的研究新熱點(diǎn)。HDACi在白血病、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、卵巢癌等腫瘤細(xì)胞中能有效抑制組蛋白去乙?；?Histone deacetylase,HDAC)的活性,改變組蛋白的乙?；癄顟B(tài),從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)停滯、分化或凋亡,具有顯著的抗腫瘤活性。

2、
　　本研究主要考察一系列新合成的HDACi對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制效果,初步探討其抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的相關(guān)機(jī)制。研究可分為以下二個(gè)部分:
　　一、 HDACi對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用
　　利用一系列新合成的組蛋白去乙酰化酶抑制劑 JZ003、JZ004、樣3、樣4作用于多種腫瘤細(xì)胞(胰腺癌細(xì)胞BxPC-3和PANC-1、白血病細(xì)胞K562、肺癌細(xì)胞A549、乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29和H

3、CT-8),用不同濃度JZ003、JZ004、樣3、樣4處理各腫瘤細(xì)胞,MTT法檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,觀察各藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響。
　　結(jié)果:JZ004、樣4處理胰腺癌細(xì)胞BxPC-3和PANC-1、白血病細(xì)胞K562、肺癌細(xì)胞A549、乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29和HCT-8后,各腫瘤細(xì)胞均呈現(xiàn)不同程度的生長(zhǎng)抑制,并與時(shí)間、劑量呈正相關(guān),其中 JZ004對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖抑制作用尤為顯著。而經(jīng)JZ003

4、、樣3處理后,各組細(xì)胞均未見明顯生長(zhǎng)抑制作用。
　　二、HDACi誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡及其機(jī)制探討
　　選取經(jīng)藥物篩選后功效較為顯著的JZ004作用于較為敏感的結(jié)腸癌細(xì)胞(HT-29和HCT-8),利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期停滯、細(xì)胞凋亡,Rhodamine123和DCFH-DA測(cè)定細(xì)胞線粒體膜跨膜電位及ROS產(chǎn)生的變化,免疫印跡法(Western blot法)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Acetylated histone H3、p21、CD

5、K4、Bcl-2、Bax、Mcl-1等相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。觀察JZ004對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響,并對(duì)JZ004抗癌的機(jī)制作初步的探討。
　　結(jié)果:流式分析結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8、HT-29凋亡率隨藥物濃度增高而增加;JZ004處理72h后,p21表達(dá)水平上調(diào),CDK4蛋白表達(dá)下降,細(xì)胞周期停滯于G0/G1期而抑制細(xì)胞的生長(zhǎng),細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生增多,且線粒體跨膜電位顯著下降,促凋亡蛋白Bax的表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì),而抑凋亡

6、蛋白Bcl-2、Mcl-1則受到表達(dá)抑制。
　　綜上所述,JZ004和樣4作為新型的組蛋白去乙酰化酶抑制劑對(duì)胰腺癌、白血病、肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等腫瘤細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用。其中JZ004對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞具有顯著的阻滯細(xì)胞周期和誘導(dǎo)凋亡作用,而進(jìn)一步研究顯示其阻滯細(xì)胞周期作用可能由p21蛋白過表達(dá)導(dǎo)致,而誘導(dǎo)凋亡機(jī)制可能與Bcl-2家族蛋白表達(dá)水平變化有關(guān)。提示以JZ004為代表的一類新型HDACi具有成為腫瘤臨床化療藥物的潛能