大網(wǎng)膜切除對(duì)非酒精性脂肪性肝病大鼠血清及肝組織脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素表達(dá)的影響.pdf

1、背景與意義：NAFLD是一種以無過量飲酒史，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞脂肪變性和脂肪貯積為特征的臨床病理綜合征，胰島素抵抗(IR)在其發(fā)病機(jī)制中占重要地位。在西方國家，NAFLD的人群患病率高達(dá)20％-40％。隨著生活方式的變化，近10年我國其患病率迅速增長，且呈大眾化和低齡化趨勢。NAFLD日漸成為一個(gè)被廣泛關(guān)注的醫(yī)學(xué)問題和社會(huì)問題，但其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。內(nèi)臟脂肪主要分布于大網(wǎng)膜、腸系膜等，通過門靜脈與肝臟直接相連，有著十分強(qiáng)大內(nèi)分泌功能，其

2、分泌脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素可通過門靜脈直接到達(dá)肝臟。脂聯(lián)素僅在脂肪組織中特異表達(dá)，目前研究認(rèn)為與IR關(guān)系密切，被認(rèn)為是代謝綜合征的生物學(xué)標(biāo)志。而內(nèi)臟脂肪素可促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化和沉積，調(diào)節(jié)外周組織對(duì)胰島素的敏感性，且其作用大小與內(nèi)臟脂肪的數(shù)量有明顯相關(guān)性。由此提示，內(nèi)臟脂肪可能通過脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素介導(dǎo)在NAFLD的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。但迄今為止，國內(nèi)、外有關(guān)內(nèi)臟脂肪在NAFLD發(fā)病中的作用及機(jī)制的研究鮮見文獻(xiàn)報(bào)道。為此，本研究利用大網(wǎng)膜

3、切除術(shù)聯(lián)合/或高脂飲食誘導(dǎo)的NAFLD大鼠模型，并采用ELISA、RT-PCR、Western-blotting技術(shù)，研究造模前、后進(jìn)行大網(wǎng)膜切除術(shù)對(duì)NAFLD大鼠血及肝組織脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素表達(dá)的影響及其血生化指標(biāo)、肝臟病理學(xué)改變的差異，旨在探索內(nèi)臟脂肪在NAFLD發(fā)病機(jī)制中的作用及其機(jī)制，為NAFLD早期的臨床防治提供新的思路。 目的：采用大網(wǎng)膜切除術(shù)聯(lián)合/或高脂飲食誘導(dǎo)的NAFLD模型，研究造模前、后進(jìn)行大網(wǎng)膜切除術(shù)對(duì)NA

4、FLD大鼠血清及肝組織脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素表達(dá)的影響。 方法：選用4周齡雄性Wistar大鼠90只。隨機(jī)分為5組，每組18只大鼠，并設(shè)立4W、8W、12W三個(gè)時(shí)相點(diǎn)進(jìn)行觀察，每一時(shí)相點(diǎn)6只大鼠。①A組：正常對(duì)照組；②B組：單純大網(wǎng)膜切除組；③C組：單純高脂飲食誘導(dǎo)組；④D組：先行大網(wǎng)膜切除+高脂誘導(dǎo)組，在大網(wǎng)膜切除基礎(chǔ)上進(jìn)行高脂誘導(dǎo)；⑤E組：先行高脂誘導(dǎo)+大網(wǎng)膜切除組，在高脂誘導(dǎo)8周的基礎(chǔ)上進(jìn)行大網(wǎng)膜切除。采用HE染色光鏡下觀察各

5、組大鼠肝組織病理學(xué)變化；采用全自動(dòng)生化分析儀檢測各組大鼠血清甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平；采用ELISA法檢測各組大鼠血清脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素濃度變化；采用RT-PCR法檢測各組大鼠肝組織中脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素mRNA的表達(dá)水平；采用Western blotting法檢測各組大鼠肝組織中脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素蛋白表達(dá)。 結(jié)果： 1、各組大鼠肝臟病理組織學(xué)改變

6、 采用高脂飲食誘導(dǎo)聯(lián)合/或大網(wǎng)膜切除術(shù)，均可成功建立NAFLD大鼠模型。在第4、8、12周末，正常對(duì)照組(A組)和單純大網(wǎng)膜切除組(B組)肝細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)正常。采用HE染色，在建模第4周末，C、E組可見肝小葉結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞索清晰，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，肝竇無擴(kuò)張，部分肝細(xì)胞有少量脂滴沉積，病理診斷為Fl。D組可見肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞索存在，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，部分胞漿疏松，肝竇無擴(kuò)張，部分肝細(xì)胞有少量脂滴沉積，病理診斷為FO；在建模第8周末，

7、C、E組可見肝小葉結(jié)構(gòu)基本完整，細(xì)胞索清晰，肝細(xì)胞濁腫，肝竇無明顯擴(kuò)張，肝細(xì)胞有脂滴沉積，無明顯炎細(xì)胞浸潤，病理診斷為F2，GO。D組可見肝小葉完整，肝細(xì)胞大小、形態(tài)基本一致，細(xì)胞索清晰，肝細(xì)胞腫大，部分胞漿疏松，肝竇無擴(kuò)張，部分肝細(xì)胞有脂滴沉積，肝細(xì)胞及匯管區(qū)無炎細(xì)胞浸潤，病理診斷為Fl，GO；在建模第12W末，C組可見肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞索模糊，肝細(xì)胞大小不一，部分肝細(xì)胞界限不清，肝細(xì)胞大量脂滴沉積，為大小泡混合性，肝竇顯示不清，

8、部分小葉散在炎細(xì)胞浸潤，病理診斷為F4度，G1期。D組小葉結(jié)構(gòu)基本完整，肝細(xì)胞索較清晰，部分胞漿疏松，肝細(xì)胞內(nèi)較多的脂滴沉積，肝竇無擴(kuò)張，無明顯的炎細(xì)胞浸潤，病理診斷為F3，GO。E組可見肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，部分肝細(xì)胞索存在，部分肝細(xì)胞完整，肝竇清晰，大量脂滴沉積，病理診斷為F3，G1。 2、各組大鼠血生化指標(biāo)變化： 隨著造模時(shí)間的延長，C組、D組、E組大鼠血清ALT、AST、TG、FFA有升高的趨勢。與正常組及單純大網(wǎng)膜切

9、除組對(duì)應(yīng)時(shí)相點(diǎn)比較，C組、D組、E組血清TG、FFA濃度明顯升高(P<0.01)；在第8W、12W末，與正常組及單純大網(wǎng)膜切除組比較，C組、D組、E組血清AL1，、AST濃度明顯升高(P<0.05)；在第8W、12W末，與D組對(duì)應(yīng)時(shí)相點(diǎn)比較，C組血ALT、AST、TG、FFA顯著升高(P<0.05)。在12W末，與E組比較，單純高脂誘導(dǎo)組血清FFA、TG濃度明顯增高(P<0.05)。 3、各組大鼠血清脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素濃度變化：

10、 與正常組對(duì)應(yīng)時(shí)相點(diǎn)比較，C組、E組血清脂聯(lián)素濃度明顯降低(P<0.05)，而內(nèi)臟脂肪素濃度升高(P<0.05)；與正常對(duì)照組比較，在第4周末，D組血清脂聯(lián)素濃度下降不明顯(P>0.05)，在第8、12周末，濃度明顯下降(P<0.05)；與E組比較，在第12周末，C組血清脂聯(lián)素明顯降低(P<0.05)，而內(nèi)臟脂肪素濃度則明顯升高(P<0.05)。 4、各組大鼠肝組織脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素mRNA表達(dá)變化： 在各個(gè)時(shí)相

11、點(diǎn)正常對(duì)照組肝組織中脂聯(lián)素-mRNA無明顯表達(dá)。在第8周末，C組、D組、E組肝組織中脂聯(lián)素-mRNA有表達(dá)，但各組間進(jìn)行比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。在12W末，分別與D組、E組比較，C組脂聯(lián)素-mRNA表達(dá)明顯增加(P<0.05)。在各個(gè)時(shí)相點(diǎn)正常對(duì)照組肝組織中內(nèi)臟脂肪素mRNA均有明顯表達(dá)。隨著造模時(shí)間延長，C組內(nèi)臟脂肪素mRNA表達(dá)有增加的趨勢。在第8周、12周末，與D組比較，C組內(nèi)臟脂肪素mRNA表達(dá)均明顯增加(P<0.0

12、5)。在第12周末，與E組比較，C組內(nèi)臟脂肪素mRNA表達(dá)均明顯增加(P<0.05)。 5、肝組織脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素蛋白的表達(dá)變化： 在各個(gè)時(shí)相點(diǎn)正常對(duì)照組肝組織中脂聯(lián)素蛋白無明顯表達(dá)。在第8周末，C組、D組、E組肝組織中脂聯(lián)素蛋白有表達(dá)，但各組間進(jìn)行比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。在12W末，分別與D組、E組比較，C組脂聯(lián)素蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.05)。在各個(gè)時(shí)相點(diǎn)正常對(duì)照組肝組織中內(nèi)臟脂肪素蛋白有明顯表達(dá)。隨

13、著造模時(shí)間延長，C組內(nèi)臟脂肪素蛋白表達(dá)有增加的趨勢。在第8周、12周末，與D組比較，C組內(nèi)臟脂肪素蛋白表達(dá)均明顯增加(P<0.05)。在第12周末，與E組比較，C組內(nèi)臟脂肪素蛋白表達(dá)均明顯增加(P<0.05)。 結(jié)論： 1、采用高脂飲食誘導(dǎo)聯(lián)合/或大網(wǎng)膜切除術(shù)，均可可成功建立NAFLD大鼠模型。 2、建模前行大網(wǎng)膜切除可明顯減低NAFLD模型大鼠血清內(nèi)臟脂肪素及肝組織中脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素表達(dá)，而明顯提高血清中脂聯(lián)