替米沙坦對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠肝組織PPARs及脂聯(lián)素受體2表達(dá)的影響.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的，以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征，包括單純性脂肪肝以及由其演變的脂肪性肝炎(NASH)和肝硬化。近年來，隨著人們生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變，NAFLD的發(fā)病率逐年增高，在西方國家及全世界逐漸成為最普遍的慢性肝臟疾病。隨著肥胖和代謝綜合征全球化的流行趨勢及人口老齡化和病毒性肝炎的有效控

2、制，NAFLD患者越來越多并終將成為終末期肝病的重要病因。
　　美國臨床內(nèi)分泌醫(yī)師協(xié)會(huì)提出胰島素抵抗(Insulin resistance，IR)是NAFLD的始動(dòng)及中心環(huán)節(jié)。在IR狀態(tài)下，機(jī)體脂質(zhì)代謝平衡紊亂，肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過量積聚，然后是氧自由基引起的脂質(zhì)過氧化及以瀑布效應(yīng)誘發(fā)的一系列炎癥反應(yīng)，因此IR成為當(dāng)前研究和早期防治NAFLD的熱點(diǎn)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，脂肪組織不僅參與能量代謝，還通過分泌多種脂肪細(xì)胞因子參與脂肪肝的發(fā)生發(fā)展

3、。脂聯(lián)素是由脂肪細(xì)胞分泌的一種特異性的血漿蛋白，具有抗炎、抗動(dòng)脈硬化、改善糖脂代謝、提高胰島素敏感性等作用，脂聯(lián)素和受體結(jié)合后引起下游一系列信號(hào)分子改變，從而發(fā)揮上述效應(yīng)。
　　替米沙坦，一種新型的血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑(ARB)，被發(fā)現(xiàn)除了阻斷AT1受體外，還是PPARγ的部分激動(dòng)劑，具有改善糖脂代謝，阻止體重增加，促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的作用。
　　因此，我們研究在高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪肝IR大鼠模型造模成功后，給予兼有ARB與部

4、分興奮PPARγ雙重作用的替米沙坦干預(yù)，探討其對(duì)肝臟脂肪變的炎癥程度和胰島素敏感性的作用，為進(jìn)一步研究NAFLD的發(fā)病機(jī)制，合理進(jìn)行早期防治提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的：建立非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型，探討替米沙坦對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠體重、血清轉(zhuǎn)氨酶、血脂、血糖、IR及肝臟病理、肝組織PPARs及脂聯(lián)素受體2等表達(dá)的影響，為進(jìn)一步治療本病提供新的方法及思路。
　　方法：
　　1.動(dòng)物模型的制備：選取雄性(Sprague

5、Dawley)SD大鼠，正常對(duì)照組喂飼普通飼料，高脂對(duì)照組飼以84％普通飼料+高脂飼料，配方為：1％膽固醇、5％蛋黃粉、10％豬油，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由進(jìn)食及飲水。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組：將SD大鼠40只隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC group，n=15)、高脂對(duì)照組(FC group，n=15)，高脂+替米沙坦干預(yù)組(FT group，n=10)。飼養(yǎng)12周末時(shí)隨機(jī)取NC及FC組各5只做高胰島素正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)及肝組織的HE染色，確定造模成功。

6、后FT組給予替米沙坦(5mg.kg-1.d-1)灌胃并繼續(xù)予高脂飲食，NC及FC組則以等容量的生理鹽水灌服，每日一次，共持續(xù)4周。
　　3.大鼠體重、肝濕重和肝指數(shù)的變化：應(yīng)用電子天平稱取體重及肝濕重，并根據(jù)以下公式計(jì)算肝指數(shù)：肝濕重/體重×100％。
　　4.胰島素敏感性測定：我們以高胰島素正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)技術(shù)在穩(wěn)態(tài)時(shí)葡萄糖的輸注速率(GIR)評(píng)估胰島素的敏感性。
　　5.肝組織學(xué)檢查：應(yīng)用石蠟切片，采用蘇木精-伊紅

7、(hematoxylin-eosinHE)染色的方法，在光鏡下觀察肝臟病理學(xué)的變化情況。
　　6.PPARα、γ，AT1R及脂聯(lián)素受體2 mRNA表達(dá)：采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法測定肝組織中PPARα、PPARγ、AT1R、脂聯(lián)素受體2(Adipo R2)mRNA的表達(dá)水平及替米沙坦干預(yù)后對(duì)PPARα、γ、AT1R、Adipo R2 mRNA表達(dá)的影響。
　　7.血清生化學(xué)的檢測：取血清樣本，在河北

8、醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院生化室的協(xié)助下，應(yīng)用全自動(dòng)血清生化分析儀檢測轉(zhuǎn)氨酶及血脂等生化指標(biāo)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.各組大鼠的體重、肝濕重和肝指數(shù)的變化：在16周末成功的復(fù)制了大鼠NASH模型。FC組大鼠的體重(597.51±15.62)、肝濕重(21.93±1.65)和肝指數(shù)(3.67±0.23％)均明顯的高于NC組體重(523.37±18.43)、肝濕重(12.39±0.96)和肝指數(shù)(2.37±0.17％)(P均<0.01

9、)差異顯著。而FT組的體重(559.65±15.80)、肝濕重(16.10±1.13)和肝指數(shù)(2.88±0.17％)均明顯低于FC組(P均<0.01)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.關(guān)于胰島素敏感性的變化：各組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩兩比較結(jié)果顯示，NC組明顯高于其它兩組，而FT組高于FC組。
　　3.肝組織病理學(xué)的變化情況：NC組無肝細(xì)胞脂肪變性，且未見炎細(xì)胞浸潤。而FC組呈彌漫性大泡或小泡性脂肪變，以大泡性為主的混合性脂肪

10、變性，脂肪變性肝細(xì)胞面積達(dá)2/3以上，以中央靜脈周圍最為顯著，并可見程度不一的小葉內(nèi)炎癥及匯管區(qū)炎癥，點(diǎn)灶狀壞死，部分壞死甚至融合成片，與NC組相比差異顯著(P<0.01)。FT組肝細(xì)胞脂肪變性分級(jí)較FC組改善(P<0.05)，炎癥分級(jí)較FC組降低(P<<0.05)。
　　4.血清生化指標(biāo)的變化：(1)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)：FC組血清ALT水平(97.57±9.02)顯著高于NC組(43.1

11、4±8.38)(P<0.01)，而FT組血清ALT水平(71.00±10.41)顯著低于FC組(P<0.01)，但與正常組仍有差異。FC組血清AST水平(221.00±26.52)顯著高于NC組(121.86±10.35)(P<0.01)，F(xiàn)T組血清AST水平(153.29±16.46)顯著低于FC組(P<0.01)。(2)血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)：FC組血清TC、TG水平(1.41±0.

12、17，0.73±0.17)顯著高于NC組(0.78±0.16，0.27±0.08)(P<0.01)，F(xiàn)T組血清TC、TG水平(1.22±0.24，0.60±0.13)低于FC組，但無顯著性差異(P>0.05)；FC組血清HDL-C水平(0.73±0.07)低于NC組(0.92±0.05)(P<0.01)，而FT組血清HDL-C水平(0.79±0.04)高于FC組，但無顯著性差異(P>0.05)。(3)血糖：FC組空腹血糖水平(11.88

13、±2.13)顯著高于NC組(5.53±1.13)(P<0.01)，F(xiàn)T組空腹血糖水平(9.22±1.40)低于FC組(P<0.05)。
　　5.PPARα、PPARγ、AT1R和Adipo R2 mRNA表達(dá)：(1)肝組織PPARαmRNA變化：與NC組(0.449±0.025)相比，F(xiàn)C組(0.207±0.017)顯著降低(P<0.01)，F(xiàn)T組(0.376±0.014)較FC組明顯升高(P<0.01)。(2)肝組織PPARγm

14、RNA變化：與NC組(0.389±0.014)相比，F(xiàn)C組(0.167±0.015)顯著降低(P<0.01)；FT組(0.308±0.018)較FC組明顯升高(P<0.01)。(3)肝組織AdipoR2 mRNA變化：與NC組(0.431±0.015)相比，F(xiàn)C組(0.236±0.028)顯著降低(P<0.01)；FT組(0.340±0.020)明顯高于FC組(P<0.01)。(4)肝組織AT1R mRNA變化：與NC組(0.198±0

15、.016)相比，F(xiàn)C組(0.321±0.022)顯著增加(P<0.01)；FT組(0.342±0.016)較FC組升高，但無顯著性差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：16周高脂飼料飲食可成功誘導(dǎo)大鼠NASH的形成。替米沙坦能改善IR和糖脂代謝并降低體重，減輕肝臟脂肪變性及炎癥壞死，降低血清TC、TG水平，改善NASH大鼠IR及肝臟病理，對(duì)大鼠NASH起到有效的治療作用。其分子機(jī)制可能與其PPARγ和PPARα雙重激動(dòng)作用，特異性結(jié)合