消脂護(hù)肝膠囊對非酒精性脂肪肝大鼠病理亞微結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、本課題在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，在前期臨床及實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，探討消脂護(hù)肝膠囊抑制高脂飲食聯(lián)合四環(huán)素腹腔注射致大鼠脂肪肝模型的作用機(jī)制。并通過對肝組織病理及亞微結(jié)構(gòu)方面的影響，來進(jìn)一步揭示其作用機(jī)理，為該方的進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)的依據(jù)和更好的指導(dǎo)臨床。 方法：SD大鼠72只，按體重分層隨機(jī)分為6組，即空白組、模型組、東寶肝泰組、消脂護(hù)肝高、中、低劑量組各12只。常規(guī)飼養(yǎng)一周后，除空白組予基礎(chǔ)飼料外，其余5組均飼以高脂飼料（84％基礎(chǔ)飼

2、料+10％豬油+5％蛋黃粉+1％膽固醇），并于造模第1天腹腔注射四環(huán)素15mg/100g·鼠重，其后每6天一次腹腔注射四環(huán)素10mg/100g·鼠重，計(jì)6次。每周稱一次鼠重，并相應(yīng)調(diào)整給藥量。自造模第2周起，除空白組外，各組均按1ml/100g·d-1鼠分別灌服生理鹽水及相應(yīng)藥物，將消脂護(hù)肝膠囊溶于生理鹽水中稀釋成不同濃度，高、中、低劑量組分別按0．15g/100g·d-1、0．075g/100g·d-1、0．0375g/100g·d-

3、1灌胃（分別相當(dāng)于成人用藥量的20倍、10倍和5倍）：東寶肝泰溶于生理鹽水中，灌服劑量為0．06g/100g·d-1（相當(dāng)于成人用藥量的10倍）。于實(shí)驗(yàn)造模第7周結(jié)束時(shí)處死各組動物，方法：隔夜禁食，次日以10％水合氯醛溶液30mg/100g體重腹腔內(nèi)注射麻醉后，從腹主動脈采血，然后迅速取出肝臟稱肝濕重，并隨機(jī)選取空白對照組3號、5號和10號，模型對照組3號、5號和12號，東寶肝泰對照組2號、5號和8號，消脂護(hù)肝高劑量組2號、5號和6號，

4、中劑量組6號、8號和12號，低劑量組6號、11號和12號肝左葉0．1cm×0．1cm×0．6cm大小標(biāo)本2～4塊經(jīng)戊二醛鍔酸固定，環(huán)氧樹脂包埋，做超薄切片，透射電鏡觀察肝組織超微結(jié)構(gòu)變化。然后取全部標(biāo)本同部位肝左葉1塊0．5cm×1cm×0．3cm組織置于10％磷酸緩沖甲醛液固定，常規(guī)HE染色。檢測項(xiàng)目有血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-

5、C）。 結(jié)果：1．模型組大鼠血清TG、TC、LDL-C、ALT、AST及肝指數(shù)非常顯著高于正常組（P<0．01），血清HDL-C值非常顯著低于正常組（P<0．01）。2．消脂護(hù)肝膠囊高、中、低劑量組及東寶肝泰對照組大鼠血清TG、TC、LDL-C、ALT、AST及肝指數(shù)非常顯著低于模型組（P<0．01）：血清HDL-C值非常顯著高于模型組（P<0．01）。3．消脂護(hù)肝膠囊高劑量組大鼠血清TG、TC、LDL-C、ALT、AST及肝指

6、數(shù)顯著低于東寶肝泰對照組（P<0．05），血清HDL-C值顯著高于東寶肝泰對照組（P<0．05）。4．消脂護(hù)肝膠囊高劑量組大鼠血清HDL-C值顯著高于消脂護(hù)肝膠囊中、低劑量組（P<0．05），TG、TC、LDL—C、ALT、AST值及肝指數(shù)顯著低于消脂護(hù)肝膠囊中、低劑量組（P<0．05）。5．病理學(xué)觀察：①光學(xué)顯微鏡顯示，模型組大鼠肝臟呈現(xiàn)明顯的脂肪變性，與正常組比較有非常顯著差異（P<0．01）；消高、消中組與模型組比較有非常顯著性差

7、異（P<0．01），陽性對照組與模型組比較有顯著性差異（P<0．05），消低組與模型組比較有差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05）；消高組與陽性對照組比較有顯著性差異（P<0．05），消中組和消低組與陽性對照組比較無顯著性差異（P>0．05）；消高組與消中組比較有顯著性差異（P<0．05），消高組與消低組比較有非常顯著性差異（P<0．01），消中組與消低組比較有顯著性差異（P<0．05）。②透射電鏡顯示，模型組肝細(xì)胞內(nèi)可見大量的脂滴，胞漿內(nèi)的

8、線粒體數(shù)量明顯減少，線粒體嵴大部分變短或消失，嵴間腔明顯增寬，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯減少，呈囊袋狀，核蛋白體出現(xiàn)脫顆粒現(xiàn)象。細(xì)胞核呈現(xiàn)水腫狀態(tài)，染色質(zhì)基本都靠在核膜，核仁也靠在核膜邊。與模型組相比，除消低組外，各用藥組大鼠肝組織的超微結(jié)構(gòu)顯示出不同程度的改善趨勢，脂變肝細(xì)胞數(shù)目減少，胞漿內(nèi)脂滴減少或消失，胞漿豐富，胞漿內(nèi)的線粒體數(shù)量有所增加，線粒體嵴較模型組豐富，嵴間腔明顯變窄，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有所增加，核蛋白體較模型組豐富。經(jīng)立體計(jì)量分析，單因素方

9、差分析結(jié)果表明，模型組與空白對照組比較有顯著性差異（P<0．01），即造模后肝細(xì)胞線粒體體密度（Vv）、比膜面（δm）、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)比膜面（δm）均顯著降低（P<0．01），肝細(xì)胞內(nèi)脂滴體密度（Vv）、線粒體比表面（δ）均顯著升高（P<0．01）。與模型組相比，陽性對照組、消高組、消中組均可顯著升高肝細(xì)胞線粒體體密度（Vv）、比膜面（δm）、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)比膜面（δm）（P<0．01），均可顯著降低肝細(xì)胞內(nèi)脂滴體密度（Vv）、線粒體比表面（δ

10、）（P<0．01）。消高組與陽性對照組比較，能極顯著升高肝細(xì)胞線粒體體密度（Vv）、比膜面（δ m）（P<0．01），顯著升高粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)比膜面（δ m）（P<0．05），顯著降低脂滴體密度（Vv）（P<0．01）。消中組與陽性對照組比較數(shù)值有差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05）。消低組與陽性對照組比較有顯著性差異，即陽性對照組能顯著升高肝細(xì)胞線粒體體密度（Vv）、比膜面（δ m）（P<0．05），顯著降低肝細(xì)胞內(nèi)脂滴體密度（Vv）、線粒體

11、比表面（δ）（P<0．01）。消高組與消中組比較，可顯著升高肝細(xì)胞線粒體體密度（Vv）、比膜面（δm）（P<0．01），顯著降低線粒體比表面（δ）（P<0．01），其他指標(biāo)無顯著性差異。消高組與消低組比較，能顯著升高肝細(xì)胞線粒體體密度（Vv）、比膜面（δ m）（P<0．01）、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)比膜面（δ m）（P<0．05），能顯著降低肝細(xì)胞內(nèi)脂滴體密度（Vv）、線粒體比表面（δ）（P<0．01）。消中組與消低組比較，僅能顯著升高肝細(xì)胞線粒體

12、比膜面（δ m）（P<0．01），其他指標(biāo)無顯著性差異。在細(xì)胞核常、異染色質(zhì)方面，模型組常染色質(zhì)顯著高于空白對照組（P<0．01），各治療組均顯著低于模型組（P<0．01）。 結(jié)論： 1．模型組動物的肝細(xì)胞線粒體嚴(yán)重受損，能量代謝下降，以致血脂代謝障礙，與正常對照組比較有顯著性差異，實(shí)驗(yàn)證明該動物模型復(fù)制是成功的。 2．消脂護(hù)肝膠囊治療脂肪肝的機(jī)制為，通過增加線粒體嵴和線粒體數(shù)量，改善粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆?，F(xiàn)象，保護(hù)肝