十味調(diào)脂方對非酒精性脂肪性肝病模型大鼠肝組織PPARαmRNA表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：十味調(diào)脂方（柴胡、丹參、絞股藍(lán)、水紅花子、姜黃、首烏藤、生山楂、澤瀉、決明子、茺蔚子）具有疏肝理氣、泄?jié)嵯龅墓π?，為?dǎo)師臨床用于治療非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的有效方劑，為進(jìn)行深入研究，采用高脂飲食法復(fù)制大鼠NAFLD模型，并施加藥物干預(yù)，觀察本方對NAFLD大鼠血脂、肝功能、肝組織形態(tài)學(xué)及肝組織過氧化物酶體增殖物激活受體 mRNA（PPARαmRNA）表達(dá)的影響，探討本方治療NAFLD的可能作用機(jī)制。
　　方法：將

2、40只清潔級健康雄性Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，根據(jù)體重分層隨機(jī)分為4個(gè)組：正常組（N）、模型組（M）、十味調(diào)脂方組（Z）、非諾貝特組（X），每組各10只。正常組大鼠給予常規(guī)飼料，其他各組均給予高脂飼料飼養(yǎng)。8周后，除正常組外，從其余各組中分別抽取1只大鼠處死，行肝組織病理學(xué)檢查，確定造模是否成功。確定造模成功后，正常組與模型組均予生理鹽水灌胃，各治療組大鼠給予相應(yīng)藥物灌胃治療，干預(yù)4周后處死所有大鼠，取血清及肝臟組織標(biāo)本，采用2

3、,4-二硝基苯肼法（比色法）檢測血清中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）及天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）含量的變化；應(yīng)用色譜-可見分光光度法測定肝組織中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）含量；采用蘇木精-伊紅染色法（HE）染色觀察大鼠肝組織的病理形態(tài)變化；運(yùn)用RT-PCR法檢測大鼠肝臟中PPARαm RNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠一般情況。實(shí)驗(yàn)過程中，各組大鼠均未出現(xiàn)死亡，正常組大鼠精

4、神良好，靈活好動(dòng)，皮毛整潔光澤，體重逐漸增加；模型組初期體重明顯增長，增長速度快于正常組，至7-8周體重增長較前緩慢，精神較萎靡，且喜臥懶動(dòng)，食欲較前減退，皮毛凌亂，毛色晦暗，大便粘滯；各藥物干預(yù)組大鼠在一定程度上均有上述改變，但介于正常組和模型組之間。
　　2.大鼠肝臟的病理學(xué)變化。肉眼觀察：正常組大鼠肝臟體積正常，色鮮紅，表面光滑，邊緣銳利，切面整齊；模型組大鼠肝臟體積明顯增大，顏色偏黃，質(zhì)軟，包膜緊張，邊緣變鈍，切面油膩感；

5、治療組肝臟體積稍大，顏色與正常組接近，部分肝臟之切面稍有油膩感。
　　光鏡觀察：正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，輪廓清晰，肝索排列整齊,以中央靜脈為中心放射狀排列，肝索與肝竇比例正常，肝細(xì)胞大小較一致，結(jié)構(gòu)無異常，無脂滴及空泡，無炎性細(xì)胞浸潤，細(xì)胞核正常、居中，胞質(zhì)豐富。模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝索放射狀排列消失，可見炎性細(xì)胞浸潤；大部分肝細(xì)胞腫脹，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量大小不等的脂滴空泡，呈中、重度度彌漫性大泡性脂肪變。中藥組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)

6、較完整，輪廓清晰，肝細(xì)胞無明顯腫脹，部分細(xì)胞內(nèi)可見少量細(xì)小脂滴,未見明顯炎性細(xì)胞浸潤。西藥組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)稍紊亂，肝細(xì)胞輕度腫脹，胞漿內(nèi)可見少量大小不等的脂滴，未見明顯炎性細(xì)胞浸潤。
　　3.大鼠血清和肝組織指標(biāo)含量比較
　　3.1各組大鼠血清中TG、TC含量比較。與正常組相比，模型組大鼠的血清TG、TC含量升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，中藥組與西藥組血清TG、TC含量均明顯降低，具有顯著性差異。與中藥組相比，西藥

7、組血清TG、TC降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.2各組大鼠血清中ALT、AST含量比較。與正常組相比，模型組大鼠的血清ALT、AST含量明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，中藥組與西藥組大鼠血清ALT、AST均明顯降低，具有顯著性差異。與西藥組相比，中藥組血清ALT、AST降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.3各組大鼠肝臟組織中TG、TC含量比較。與正常組相比，模型組大鼠肝臟組織中TG、TC含量明顯升高，差異具有

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，中藥組與西藥組大鼠肝臟組織中TG、TC含量均明顯降低，具有顯著性差異。與西藥組相比，中藥組大鼠肝臟組織中TG、TC含量降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.各組大鼠肝組織中PPARαm RNA表達(dá)水平比較。與正常組相比，模型組大鼠肝臟組織中PPARαmRNA明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，中藥組與西藥組大鼠肝臟組織中PPARαmRNA表達(dá)水平均明顯升高，具有顯著性差異。中藥組大鼠肝臟組織中PP

9、ARαmRNA水平高于西藥組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.十味調(diào)脂方能夠明顯改善非酒精性脂肪性肝病模型大鼠一般情況、肝臟組織形態(tài)學(xué)變化，是治療非酒精性脂肪性肝病的有效方劑。
　　2.十味調(diào)脂方可以調(diào)控血清中TC、TG、AST、ALT及肝組織中TC、TG含量，以改善NAFLD肝臟脂質(zhì)代謝紊亂和脂質(zhì)異常沉積的病理狀態(tài)。
　　3.十味調(diào)脂方能夠上調(diào)肝組織PPARαm RNA的表達(dá)水平，可能是改善肝臟脂質(zhì)代