大黃酸對(duì)大鼠非酒精性脂肪性肝病影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的： 非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD)發(fā)病率逐年升高，它可以發(fā)展成為肝纖維化、肝硬化等肝臟的終末期病變，其發(fā)病機(jī)理尚不完全清楚，缺乏有效的治療手段。胰島素抵抗(insulinresistance，IR)和脂質(zhì)代謝紊亂在NAFLD中起重要作用。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)大黃酸具有廣泛的藥理作用，有改善及部分逆轉(zhuǎn)IR、調(diào)脂、降糖、抗氧化、抗炎、抗纖維化等作用，故其對(duì)NAFLD

2、可能有良好的應(yīng)用前景。但目前國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)到有關(guān)大黃酸應(yīng)用于該病報(bào)道。本研究用高脂高膽固醇飲食誘發(fā)建立大鼠NAFLD模型，并以大黃酸進(jìn)行干預(yù)治療，以求闡明(1)大黃酸對(duì)NAFLD的影響；(2)探討大黃酸可能的作用機(jī)制；(3)大黃酸的副作用。本研究的完成將有助于進(jìn)一步認(rèn)識(shí)NAFLD的發(fā)病機(jī)理和指導(dǎo)臨床治療。 方法： 清潔級(jí)雄性SD大鼠140～160克52只(由復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房提供Ⅷ三常喂養(yǎng)1周后，分成6組： 1．

3、普通飼料組(簡(jiǎn)稱普飼組)：10只，始終以普通飼料喂養(yǎng)，12周處死2只，其余開(kāi)始每曰生理鹽水灌胃，于第20周處死。 2．高脂飼料組(簡(jiǎn)稱高脂組)：10只，始終以高脂高膽固醇飼料喂養(yǎng)(普通飼料+10％豬油+2％膽固醇)，12周處死2只，其余開(kāi)始每日生理鹽水灌胃，于第20周處死。 3．普通飼料干預(yù)組(簡(jiǎn)稱普+大組)：8只，始終以普通飼料喂養(yǎng)12周后加大黃酸，于第20周處死。 4．高脂飼料喂養(yǎng)12周后改普通飼料組(簡(jiǎn)稱高

4、改普組)：8只，以高脂高膽固醇飼料喂養(yǎng)(同上)，12周后改為普通飼料喂養(yǎng)，并開(kāi)始每日生理鹽水灌胃，于第20周處死。 5．高脂飼料喂養(yǎng)12周后加大黃酸組(簡(jiǎn)稱高+大組)：8只，始終以高脂高膽固醇喂養(yǎng)(同上)，12周后給予大黃酸灌胃，于第20周處死。 6．高脂飼料喂養(yǎng)12周后改普通飼料并加大黃酸組(簡(jiǎn)稱高改普+大組)：8只，以高脂高膽固醇喂養(yǎng)(同上)，自由飲食進(jìn)水，12周后改為普通飼料喂養(yǎng)，并同時(shí)給予大黃酸灌胃，于第20周處

5、死。 試驗(yàn)動(dòng)物自由飲水和進(jìn)食，大黃酸及生理鹽水均在每日固定時(shí)間給予，大黃酸劑量是100mg·kg-1·d-1灌胃，于試驗(yàn)第20周處死所有動(dòng)物。所有動(dòng)物均需測(cè)體重、肝臟濕重，并計(jì)算肝指數(shù)(肝濕重/體重×100％)；常規(guī)制備血清，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定空腹血糖(FBG)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)及甘油三酯(TG)和膽固醇(TC)水平，放免法測(cè)定空腹胰島素(FINS)水平，計(jì)算胰島素敏感指數(shù)ISI=-ln[1/

6、(FBG*FINS)]；常規(guī)制備HE染色病理組織切片，由有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師盲法閱片作出診斷。處死及取材方法：隔夜禁食，次日以2％戍巴比妥鈉1ml/kg腹腔內(nèi)注射麻醉，從下腔靜脈采血后處死，從肝右葉中部切取肝組織一塊。 結(jié)果： 1．12周高脂組隨機(jī)處死2只大鼠血糖及胰島素水平均較普通飼料組升高，并有明顯脂質(zhì)代謝紊亂；血清ALT、AST水平較普通飼料組明顯增高；高脂組肝組織出現(xiàn)中度脂肪變及氣球樣變性，并有散在的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

7、 2．第20周高脂組大鼠有胰島素抵抗及脂質(zhì)代謝紊亂；血清ALT、AST水平較正常組明顯增高；肝組織出現(xiàn)重度脂肪變及氣球樣變性，所有標(biāo)本出現(xiàn)小葉內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和散在的灶性壞死。 3．普+大組大鼠的各項(xiàng)生化指標(biāo)及肝臟病理與普飼組均無(wú)明顯差異；高+大組與高脂組相比，肝濕重、肝指數(shù)、胰島素抵抗和脂質(zhì)代謝紊亂程度較輕，血清AST水平較普飼組高但較高脂組有明顯下降，且均有明顯差異，但血清ALT與普飼組比無(wú)明顯差異；高+大組大鼠肝臟病

8、理的脂肪變及炎癥程度較高脂組明顯減輕；高改普組及高改普+大組大鼠肝臟病理的脂肪變及炎癥程度較高脂組明顯減輕，且有明顯差異，但高改普組和高改普+大組大鼠肝臟病理的脂肪變及炎癥程度無(wú)明顯差異。 4．所有進(jìn)食高脂飼料的大鼠安靜，不喜動(dòng)。普通飼料的大鼠易怒好斗。灌大黃酸組糞便顆粒較大，含水量較多，未見(jiàn)明顯腹瀉。 結(jié)論： 1．長(zhǎng)期高脂高膽固醇飲食建立的大鼠NA凡D模型存在胰島素抵抗，脂質(zhì)代謝紊亂 2．應(yīng)用大黃酸可改