奧沙利鉑對(duì)人肝癌7721細(xì)胞凋亡以及PARP蛋白表達(dá)的影響及意義.pdf

1、研究背景：
　　 肝細(xì)胞癌是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,發(fā)病率居全球惡性腫瘤第6位、致死率居第3位。我國(guó)肝癌患者年死亡數(shù)多達(dá)30萬(wàn),約占全球死亡數(shù)的53％,肝癌以其惡性程度高,病情進(jìn)展快,死亡率高著稱,我們?cè)谂R床工作中發(fā)現(xiàn)的肝癌患者多為中晚期,即使行根治性手術(shù),手術(shù)以后的五年生存率亦相當(dāng)?shù)?因此為了提高肝癌患者的生存率,積極探索有效的化療手段對(duì)于肝癌的綜合治療顯得尤為重要。
　　 奧沙利鉑(Oxaliplatin,L-OH

2、P)是繼順鉑、卡鉑以后出現(xiàn)的第三代鉑類抗腫瘤藥物,它不僅改善了順鉑、卡鉑的毒副作用,而且擴(kuò)大了它們的抗癌譜。,對(duì)結(jié)直腸癌、胃癌、卵巢癌療效確切,對(duì)乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、鼻咽癌、生殖器腫瘤等也有較好的療效。與順鉑,卡鉑相比具有更強(qiáng)大的抗腫瘤活性,且不良反應(yīng)少,更容易被患者接受。聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribosepolymerase,PARP)是一種位于絕大多數(shù)真核細(xì)胞胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)翻譯后的DNA修復(fù)酶,作為一種DNA受損的

3、修復(fù)酶,PARP在細(xì)胞DNA受到外界各種各樣理化因素的刺激誘導(dǎo)損傷時(shí)則被激活；且PARP的激活與DNA的受到的損傷程度呈正相關(guān)。在DNA損傷所誘發(fā)的糖基化反應(yīng)過(guò)程中,PARP能夠通過(guò)加強(qiáng)對(duì)自身的修復(fù)作用而對(duì)PARP的活性進(jìn)行負(fù)反饋調(diào)節(jié),即形成DNA損傷所誘發(fā)的PARP活性循環(huán)。因此,PARP在DNA損傷修復(fù)與細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要作用。
　　 目前,國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中很少見(jiàn)到奧沙利鉑與原發(fā)性肝癌后PARP蛋白在其表達(dá)的報(bào)道,研究PARP

4、蛋白的表達(dá)情況與人肝癌7721細(xì)胞的關(guān)系,將為探討原發(fā)性肝癌的治療,特別是化療藥物的治療提供新的思路,并為原發(fā)性肝癌的治療提供新的靶點(diǎn)。
　　 目的
　　 本研究通過(guò)體外培養(yǎng)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞,研究奧沙利鉑誘導(dǎo)后細(xì)胞的增殖及凋亡,以及其對(duì)細(xì)胞凋亡終末通路PARP蛋白表達(dá)的影響,探討奧沙利鉑抗肝癌細(xì)胞的作用機(jī)制,為其輔助治療肝癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 對(duì)肝癌細(xì)胞株SMMC-7721進(jìn)行

5、體外培養(yǎng),應(yīng)用L-OHP處理肝癌細(xì)胞,采用MTT方法測(cè)定肝癌細(xì)胞的增殖率,蛋白質(zhì)印跡(Western blot)檢測(cè)聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表達(dá)的情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,用(x)±s表示,采用單因素方差分析,用Dunnett t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較,以α=0.05作為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 MTT檢測(cè)顯示L-OHP處理24,48和72 h后SMMC-7721細(xì)胞IC50

6、分別為20、11.4和7.58 ng/μl,在24小時(shí)時(shí)間段比較不同濃度組和對(duì)照組的細(xì)胞抑制情況,結(jié)果顯示較高濃度組的L-OHP對(duì)細(xì)胞抑制情況顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；同樣在48小時(shí)和72小時(shí)時(shí)間段比較不同濃度組和對(duì)照組的細(xì)胞抑制情況,結(jié)果均顯示較高濃度組的L-OHP對(duì)細(xì)胞抑制情況顯著高于對(duì)照組(P<0.05),統(tǒng)計(jì)結(jié)果均具有顯著的差異。經(jīng)過(guò)L-OHP處理的細(xì)胞可以觀察到典型的凋亡細(xì)胞形態(tài):包膜完整,體積皺縮,核染色質(zhì)邊集。Wes