大黃素對人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721凋亡及Cyt C、Smac表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的：原發(fā)性肝癌(primary hepatic caminoma， PHC)是世界最常見且惡性程度最高的腫瘤之一，目前肝癌的化療、手術(shù)治療、介入治療等技術(shù)雖有所提高，但療效仍然不盡人意。近年來，隨著實(shí)驗(yàn)性腫瘤治療新方法的深入探索，中醫(yī)藥在抗腫瘤藥物研究中嶄露頭角，以中醫(yī)藥理論為基礎(chǔ)治療腫瘤著眼于對機(jī)體的整體調(diào)節(jié)，發(fā)揮多層次、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)的綜合作用，無論是在抑制、殺傷腫瘤細(xì)胞，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，還是改善癥狀和體征，減輕放化療毒副

2、反應(yīng)方面都發(fā)揮著重要作用，其潛在的治療價(jià)值是不可估量的。因此，有目的地對傳統(tǒng)中藥中的具體有效部位、有效成分進(jìn)行研究，尋找新的毒副作用小、療效好的抗癌藥物在肝癌的臨床和基礎(chǔ)研究中十分重要。
　　 大黃素(Emodin，EM)是大黃、虎杖等多種中藥的有效成分之一，對肝癌、乳腺癌、肺癌、及前列腺癌等多種腫瘤細(xì)胞均具有較強(qiáng)的抑制和殺傷效應(yīng)，并可逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性，抑制腫瘤血管生成及腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移。本研究擬觀察大黃素在體外對肝癌細(xì)胞

3、凋亡及線粒體細(xì)胞色素C(Cytochrome C，Cyt C)、線粒體促凋亡蛋白Smac/ DIABLO(Smac)表達(dá)水平的影響，進(jìn)一步探討其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
　　 方法：人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株培養(yǎng)后，隨機(jī)分為5組，分別用0、20、40、80μmol·L－1大黃素進(jìn)行干預(yù)，同時設(shè)置100μmol·L－15-氟尿嘧啶(5-Fu)陽性對照組，藥物作用時間均為48小時。運(yùn)用流式細(xì)胞儀Annexin V-FITC/PI

4、雙染色法檢測細(xì)胞凋亡，熒光定量PCR(Real time quantitative polymerase chain reaction, Real time PCR)檢測各組Cyt C及Smac mRNA的表達(dá)，蛋白印跡技術(shù)(Western blot)分別檢測各組細(xì)胞胞漿內(nèi)Cyt C和Smac蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：與空白對照組比較，大黃素干預(yù)后的肝癌細(xì)胞早期凋亡率明顯增高，活細(xì)胞率明顯減少(P＜0

5、.01)，隨著大黃素濃度的增加，細(xì)胞早期凋亡率呈遞增趨勢，活細(xì)胞率呈遞減趨勢；Real time PCR檢測結(jié)果顯示大黃素處理后的肝癌細(xì)胞Cyt C和Smac mRNA表達(dá)與空白對照組比較明顯增強(qiáng)(P＜0.05)；Western blot檢測結(jié)果顯示大黃素干預(yù)組胞漿內(nèi)Cyt C和Smac蛋白表達(dá)均高于空白對照組(P＜0.01)，并且隨著大黃素濃度的增高，CytC、 Smac mRNA和胞漿內(nèi)Cyt C、 Smac蛋白的表達(dá)均逐漸增強(qiáng)。<