HER2與HER4在人肺腺癌A549細(xì)胞培美曲塞繼發(fā)性耐藥中的作用研究.pdf

1、[目的]通過體外誘導(dǎo)耐藥建立人肺腺癌A549細(xì)胞系的培美曲塞耐藥細(xì)胞株，檢測(cè)其在生物學(xué)特性方面與親本株的差異，并進(jìn)一步研究其耐藥性發(fā)生與HER2/neu和HER4基因mRNA表達(dá)之間的關(guān)系。
　　 [方法]通過高濃度反復(fù)間歇誘導(dǎo)法建立A549的培美曲塞耐藥細(xì)胞系。CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖，測(cè)定細(xì)胞耐藥性，繪制生長(zhǎng)曲線，計(jì)算倍增時(shí)間;流式細(xì)胞術(shù)法檢測(cè)細(xì)胞周期分布及細(xì)胞凋亡水平;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)耐藥株及親本株HER2/neu和

2、HER4的mRNA表達(dá)。
　　 [結(jié)果]歷經(jīng)6個(gè)月建立了耐藥指數(shù)為6.7倍的培美曲塞耐藥的A549/PEM細(xì)胞系，其較親本株的倍增時(shí)間延長(zhǎng)(33.5±1.71h vs27.1±1.15h);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果示:與親本株比較，A549/PEM處于G1期的細(xì)胞比例增加(66.03±1.61％ vs57.92±1.73％)，S期細(xì)胞比例降低(30.05±1.25％ vs37.51±1.31％)，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在

3、高濃度的PEM作用24h后，檢測(cè)A549與A549/PEM細(xì)胞凋亡率分別為23.52％和10.99％，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果示:A549/PEM較親本株HER2/neu與HER4基因的mRNA表達(dá)水平分別增高100.3％和91.8％，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 [結(jié)論]培美曲塞耐藥的肺腺癌A549/PEM細(xì)胞與親本株的生物學(xué)特性有差別;肺腺癌培美曲塞繼發(fā)性耐藥的產(chǎn)生可能與HER2/