柑橘體細(xì)胞胞質(zhì)遺傳及葉綠體SSR引物開(kāi)發(fā)研究.pdf

1、該研究以38個(gè)組合的柑橘體細(xì)胞雜種(或胞質(zhì)雜種)為實(shí)驗(yàn)材料,綜合應(yīng)用RFLP、CAPS和cpSSR分子標(biāo)記技術(shù),對(duì)這些雜種的線粒體和葉綠體遺傳組成進(jìn)行了分析;同時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)體系進(jìn)行了完善與拓展,開(kāi)發(fā)了柑橘葉綠體SSR標(biāo)記;并對(duì)柑橘愈傷組織長(zhǎng)期繼代保存過(guò)程中胞質(zhì)基因組遺傳變異進(jìn)行了分析,主要結(jié)果如下:1、完善了柑橘類作物的DNA提取方法.2、對(duì)4個(gè)屬間組合的體細(xì)胞雜種和3個(gè)種間組合的胞質(zhì)雜種(或體細(xì)胞雜種)的5個(gè)葉綠體區(qū)域和3個(gè)線粒體區(qū)域

2、進(jìn)行了CAPS分析.3、用5種限制性內(nèi)切酶對(duì)38個(gè)組合的雜種DNA進(jìn)行酶切,并與12個(gè)線粒體探針隨機(jī)組合進(jìn)行RFLP分析.4、對(duì)伏令夏橙+寧波金柑的體細(xì)胞雜種在1年中按月連續(xù)采樣,進(jìn)行RFLP分析結(jié)合田間觀察,發(fā)現(xiàn)線粒體DNA的丟失會(huì)導(dǎo)致植株的枯死,表明體細(xì)胞雜種的生長(zhǎng)異常與線粒體遺傳不穩(wěn)定性有關(guān).5、貫穿RFLP和CAPS分析結(jié)果,38個(gè)組合中僅有14個(gè)組合檢測(cè)到了葉綠體多態(tài)性,整體上呈現(xiàn)隨機(jī)分離的趨勢(shì).6、開(kāi)展了體細(xì)胞雜種及胞質(zhì)雜種

3、的線粒體和葉綠體基因組的RT-PCR分析.7、根據(jù)黑松(Pinus thunbergii)、水稻(Oryza sativa)、煙草(Nicotiana tabacum)和擬南芥(Arabidopsis thaliana)葉綠體基因組序列設(shè)計(jì)的33引物,對(duì)柑橘類作物的總DNA進(jìn)行擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)篩選得到了14對(duì)能特異擴(kuò)增的引物,分別命名為SPCC1-SPCC14.8、選取23份愈傷組織材料,以對(duì)應(yīng)的田間葉片作對(duì)照,對(duì)它們?cè)陂L(zhǎng)期繼代保存過(guò)程中線粒