棉花體細(xì)胞胚的再生及棉花遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、目的：新疆是我國(guó)最大的棉花種植基地，質(zhì)量好，產(chǎn)量高，但是目前推廣的品種纖維品質(zhì)在國(guó)際市場(chǎng)上還沒(méi)有明顯的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，棉纖維品質(zhì)的改良已經(jīng)成為棉花育種工作面臨的攻關(guān)瓶頸。棉花再生體系建立存在很多困難，對(duì)基因型的依賴、體細(xì)胞胚發(fā)生率低、畸形苗比例高、周期偏長(zhǎng)等原因都制約著轉(zhuǎn)基因育種的發(fā)展。探索生物技術(shù)育種新方法，特別是轉(zhuǎn)基因育種新方法對(duì)棉纖維的品質(zhì)改良具有重要的意義。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)以新疆主栽品種新陸早33為研究對(duì)象，針對(duì)棉花轉(zhuǎn)基因

2、技術(shù)中遇到的體細(xì)胞胚胎發(fā)生頻率低，再生體系建立過(guò)程中畸形胚數(shù)量多和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棉花轉(zhuǎn)化過(guò)程中的影響因素進(jìn)行研究。以下胚軸為外植體，通過(guò)愈傷組織的誘導(dǎo)、胚性愈傷組織的分化、胚狀體的萌發(fā)，各階段對(duì)不同激素的濃度組合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，完成對(duì)棉花胚性愈傷的誘導(dǎo)到體細(xì)胞胚胎發(fā)生階段的優(yōu)化；以棉花的下胚軸為受體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，誘導(dǎo)抗性愈傷組織，對(duì)所培養(yǎng)的愈傷組織進(jìn)行基因組的提取和PCR檢測(cè)。
　　 結(jié)果與結(jié)論：研究證明有利于棉花

3、的愈傷組織生長(zhǎng)的培養(yǎng)基是MSB培養(yǎng)基，激素濃度為KT 0.1 mg/L，2，4-D 0.1 mg/L，誘導(dǎo)率達(dá)到100％。挑選淡黃色的愈傷組織在MSB培養(yǎng)基，KON3加倍、高濃度的KT、低濃度IBA組合，以麥芽糖和葡萄糖為碳源進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明：質(zhì)地疏松的顆粒狀愈傷組織容易進(jìn)行分化培養(yǎng)，體細(xì)胞胚胎發(fā)生率高。選擇低鹽培養(yǎng)基，附加活性炭進(jìn)行子葉胚的成苗，能夠減少畸形胚的數(shù)量，根的褐化程度降低，有利于成苗培養(yǎng)。建立高頻率的體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)體系，