環(huán)形多肽表面修飾PET韌帶促進(jìn)骨整合的體外研究.pdf

1、背景:重建膝關(guān)節(jié)交叉韌帶損傷有多種材料，各自有不同優(yōu)缺點。聚對苯二甲酸乙二醇酯(PET)人工韌帶具有材料來源充足，適用范圍廣，力學(xué)性能良好，手術(shù)操作方便，術(shù)后康復(fù)快等優(yōu)點，具有較好應(yīng)用前景。PET人工韌帶在骨隧道內(nèi)“骨整合”效果可能影響交叉韌帶重建的遠(yuǎn)期療效。目前文獻(xiàn)報道LARS人工韌帶重建術(shù)后近期療效良好，但遠(yuǎn)期療效暫不明確。PET材料與骨界面骨整合程度，對于PET人工韌帶重建交叉韌帶術(shù)后的遠(yuǎn)期療效具有重要意義。本研究通過應(yīng)用環(huán)形多肽

2、表面修飾PET材料，促進(jìn)PET材料與細(xì)胞相結(jié)合，初步研究PET人工韌帶與骨髓道骨界面實現(xiàn)生物愈合的可行性。
　　目的:應(yīng)用c-RGDfV多肽表面修飾PET材料，初步探討PET材料與c-RGDfV多肽實現(xiàn)共價結(jié)合的方法及促進(jìn)其牢固結(jié)合的因素。將表面修飾后的PET材料與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外共培養(yǎng)，探討c-RGDfV表面修飾PET材料后促進(jìn)其生物相容性的有效性。
　　實驗方法:應(yīng)用NaOH堿性水解方法處理PET材料。將處理后的PE

3、T材料及未經(jīng)處理的PET材料分別與不同溶度的c-RGDfV多肽溶液進(jìn)行結(jié)合，采用X線衍射分析技術(shù)，分析其共價結(jié)合效果和多肽結(jié)合含量。分別將表面修飾的PET材料和未經(jīng)處理的PET材料與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)，細(xì)胞血球板計數(shù)法測定細(xì)胞的粘附率。同時應(yīng)用細(xì)胞茜素紅染色法及堿性磷酸酶法鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨誘導(dǎo)分化。
　　實驗結(jié)果:采用NaOH堿性水解方法處理PET材料方法簡單可靠，效率較高。單純將PET材料與c-RGDfV多肽混合，

4、無法實現(xiàn)與c-RGDfV多肽共價結(jié)合。采用NaOH堿性水解法處理的PET材料與c-RGDfV多肽的結(jié)合效果最佳。XPS提示:1.0mg/ml的多肽表面修飾的PET材料氮元素含量達(dá)3.15％，而未經(jīng)處理的PET材料分別與0.3mg/ml，0.75mg/ml，1.0mg/ml和1.5mg/ml的c-RGDfV多肽混合后的氮元素含量分別為0.62％，0.79％，1.05％，1.94％。新西蘭兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成功實現(xiàn)了分離、原代及傳代培養(yǎng)、冷

5、凍保存、復(fù)蘇及誘導(dǎo)分化成為成骨細(xì)胞。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與多肽表面修飾的PET材料共培養(yǎng)實現(xiàn)了早期粘附和增殖，隨著時間的延長，各組材料的細(xì)胞粘附率均明顯提高，培養(yǎng)48小時后，c-RGDfV多肽表面修飾的PET材料對細(xì)胞的粘附率顯著增高，其次為c-RGDfV多肽混合PET材料組，最后為未處理PET材料組。
　　結(jié)論:應(yīng)用NaOH堿性水解方法處理PET材料方法簡單可靠，效率較高，NaOH堿性水解法處理的PET材料與c-RGDfV多肽實現(xiàn)了