骨誘導活性多肽明膠微球制備和體外釋藥性及成骨能力研究.pdf

1、本研究包括兩部分：
　　 第一部分：骨誘導活性多肽明膠微球制備工藝優(yōu)化和體外釋藥性研究
　　 目的:制備用于骨誘導的多肽明膠微球，并研究其體外緩釋效果。
　　 方法:用乳化交聯(lián)法制備多肽明膠微球。通過預實驗篩選出4個主要影響微球粒徑大小和載藥量的因素，即明膠濃度(A)、攪拌速度(B)、投料比(C)、W/O體積比(D)。每個因素設計3個水平，按L9(34)正交表進行實驗，尋找最佳條件。采用顯微計數(shù)法測定微球粒徑，用

2、掃描電鏡觀察微球外觀、大小、形狀等表面形態(tài)，利用紫外分光光度計法檢測微球載藥量和包封率及建立多肽微球體外釋藥曲線。
　　 結(jié)果:制備微球的最佳組合為A2B1C2D3，即明膠溶液濃度25％，攪拌速度為400r/min，投料比1:15，W/O為1:15，其對微球載藥量的影響次序為投料比＞明膠溶液濃度＞W(wǎng)/O＞攪拌速度。多肽微球形態(tài)較好，平均粒徑為86.41μm，粒徑范圍在78.6～97.2um微球占總數(shù)的80％以上。多肽微球的載藥量

3、為5.42[％]，包封率85.83[％]，溶脹率71.3[％]。多肽明膠微球釋藥符合雙相動力學釋藥規(guī)律，初相為快速釋藥相，后相為緩釋相，在24h時，累積釋藥率達30.5[％]，84[％]左右的BMP-2活性肽在24d釋放出來。
　　 結(jié)論:正交實驗設計方法有助于選擇更加合適的制備條件，多肽明膠微球的制備工藝簡單可行，成球性好，具有良好的緩釋效果。
　　 第二部分：骨誘導活性多肽明膠微球?qū)Υ笫驜MSC粘附、增殖和誘導成骨分

4、化的研究
　　 目的:探討其具有骨誘導性多肽明膠微球?qū)Υ笫蠊撬杌|(zhì)干細胞(BMSC)向成骨方向定向誘導成骨分化的能力；評價多肽明膠微球?qū)Υ笫蠊撬杌|(zhì)干細胞(BMSC)的粘附、增殖及誘導成骨分化的影響。
　　 方法:實驗分四組，對照組(A)、空白明膠微球組(B)、多肽組?、多肽明膠微球組(D)。取4周的SD大鼠分離培養(yǎng)BMSCs,傳至第3代時：A組：仍采用DMEM完全培養(yǎng)基；B組：改用成骨誘導培養(yǎng)基(DMEM完全培養(yǎng)基+空

5、白明膠微球)；C組：改用成骨誘導培養(yǎng)基(DMEM完全培養(yǎng)基+P24多肽)；D組：改用成骨誘導培養(yǎng)基(DMEM完全培養(yǎng)基+P24多肽明膠微球)。繼續(xù)培養(yǎng)2～4周，流式細胞儀(FCM)鑒定培養(yǎng)細胞性質(zhì)，細胞計數(shù)得出細胞生長曲線，檢測堿性磷酸酶(ALP)活性以了解BMSC成骨分化情況。
　　 結(jié)果:培養(yǎng)細胞為BMSC。A、B、C三組細胞的數(shù)量隨時間逐步提高，均在10 d左右達到峰值，隨后進入平臺期，而D組細胞數(shù)量10d后仍呈上升狀態(tài)，