BMP9對心肌前體干細胞改善心梗大鼠心功能的影響.pdf

1、本文研究了BMP9對心肌前體干細胞改善心梗大鼠心功能的影響。本研究分兩部分：
　　 第一部分：
　　 目的：通過293細胞擴增得到高滴度的腺病毒,用AdBMP9重組腺病毒感染心肌前體干細胞使之高表達BMP9。
　　 方法：培養(yǎng)并利用293細胞對低滴度的AdBMP9和AdGFP腺病毒進行反復擴增后收集得到高滴度腺病毒。當心肌前體干細胞傳代貼壁至70％～80％時,在5 ml完全培養(yǎng)基中加入20μL擴增后的腺病毒感染心

2、肌前體干細胞6～8小時后換液,24小時后熒光倒置顯微鏡觀察綠色熒光表達并用流式細胞儀檢測細胞感染效率,RT-PCR技術檢測被感染的心肌前體干細胞BMP9的表達量。
　　 結果：⑴病毒原液經293細胞反復擴增后,獲得了高滴度的AdBMP9和AdGFP。⑵高滴度的AdBMP9和AdGFP分別感染心肌前體干細胞24小時后,流式細胞儀檢測熒光表達效率分別為46％和45％。⑶RT-PCR結果顯示AdBMP9感染的心肌前體干細胞BMP9的表

3、達量明顯增高(P<0.05),而AdGFP感染的心肌前體干細胞中BMP9的表達量跟心肌前體干細胞本身相比并無明顯的差異(P>0.05)。
　　 結論：利用293細胞擴增可以得到高滴度的腺病毒；高滴度的腺病毒對心肌前體干細胞有較高的感染率；AdBMP9感染心肌前體干細胞后BMP9的表達量明顯增高。
　　 第二部分：
　　 目的：探討B(tài)MP9能否促進心肌前體干細胞改善心梗大鼠心功能。
　　 方法：26只雄性S

4、D大鼠隨機分成三組(1)MI組(n=10):(2)MI+GFP組(n=8)；(3)MI+BMP9組(n=8)。動脈圓錐下結扎冠狀動脈左前降支10～15min后,在梗死心肌組織周圍即時多點注入生理鹽水混勻的腺病毒感染的心肌前體干細胞懸液(100μL,5～6×106個/mL)。細胞植入四周后,利用超聲心動圖檢測左室心功能參數,Masson染色計算心臟梗死面積及觀察植入細胞形態(tài)學和免疫熒光檢測α-MHC及α-actin蛋白的表達。
　　

5、 結果：⑴動脈圓錐下結扎大鼠冠狀動脈的左前降支后,成功建立心梗模型。術后4周形態(tài)學顯示,心肌梗死部位心肌細胞稀少,胞漿稀薄,有大量的纖維組織及炎癥細胞,且左心室壁明顯變薄。⑵超聲心動圖結果顯示細胞植入4周時,MI+BMP9組LVESD較MI組降低而FS則升高,均有顯著性差異(P<0.05,P<0.01)；且MI+BMP9組與MI+GFP組比較,改善更為明顯(P<0.05)。⑶MI組大鼠心肌梗死面積的百分比為39.7％±2％(n=8),

6、MI+GFP組的心梗面積百分比為37.3％±3％(n=6),MI+BMP9組的心梗面積百分比為34.6％±3％(n=7)。MI+GFP組同MI組比較(P<0.05),MI+BMP9組同MI組比較(P<0.01)且MI+BMP9組同MI+GFP組相比P<0.05)。⑷植入細胞4周后,形態(tài)學檢查發(fā)現植入的細胞離正常心肌組織越接近,細胞胞漿越飽滿,而在注入細胞團塊中央的細胞胞漿稀少。免疫熒光結果顯示,高表達BMP9的心肌前體干細胞和GFP標記