體外誘導(dǎo)人BMSCs分化為胰島樣細(xì)胞及糖濃度對(duì)其胰島素分泌的影響.pdf

1、目的:建立體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(human bone marrow mesenchymalstem cells，hBMSCs)向胰島樣細(xì)胞分化的模型，觀察不同濃度葡萄糖對(duì)所誘導(dǎo)胰島樣細(xì)胞胰島素分泌的影響。 方法:取健康成人骨髓6ml，經(jīng)Percoll離心分離出骨髓單個(gè)核細(xì)胞，接種于含10﹪胎牛血清(fetal bovine serus，F(xiàn)BS)的LG-DMEM培養(yǎng)液，利用hBMSCs的貼壁特性分離純化，傳代至第3代，分為尼

2、克酰胺(nicotinamide，NIC)誘導(dǎo)組和對(duì)照組。NIC誘導(dǎo)組又根據(jù)添加葡萄糖濃度的不同分為：①NIC組：LG-DMEM(含5.5mmol/L葡萄糖)+15mmol/L尼克酰胺+10﹪FBS；②NIC+低糖組：LG-DMEM+15mmol/L尼克酰胺+10﹪FBS+5.6mmol/L葡萄糖；③NIC+中糖組：LG-DMEM+15mmol/L尼克酰胺+10﹪FBS+11.2mmol/L葡萄糖；④NIc+高糖組：HG-DMEM．(含

3、25mmol/L葡萄糖)+15mmol/L尼克酰胺+10﹪FBS。分別于誘導(dǎo)分化的4d、11d、18d在倒置顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察；放射性免疫分析法測(cè)定培養(yǎng)液中胰島素含量；提取所誘導(dǎo)細(xì)胞中的RNA行RT-PCR，瓊脂糖凝膠電泳鑒定所誘導(dǎo)細(xì)胞中是否含有胰島素基因。 結(jié)果:1．經(jīng)：Percoll離心所獲得的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)良好，呈典型的成纖維細(xì)胞樣外觀，可穩(wěn)定傳代，增殖能力旺盛； 2．NIC誘導(dǎo)組細(xì)胞分化為胰島樣細(xì)胞，倒

4、置顯微鏡下細(xì)胞呈圓形葡萄狀聚集排列，細(xì)胞內(nèi)含有豐富的分泌顆粒。而對(duì)照條件下培養(yǎng)的hBMSCs細(xì)胞仍呈梭形纖維細(xì)胞樣，無(wú)上述細(xì)胞形態(tài)與特征； 3．與對(duì)照組相比，NIC組培養(yǎng)液中胰島素的濃度在4d、11d、18d均明顯升高(P<0.01，P<0.05)； 4．與NIC組相比，NIC+低糖組、NIC+中糖組、NIC+高糖組培養(yǎng)液中胰島素的濃度在4d時(shí)明顯升高(P<0.01)，分別是NIC組的5.75倍、2.17倍、1.85倍；11d時(shí)NIC+

5、低糖組培養(yǎng)液中胰島素的濃度仍明顯升高(P<0.01)，是NIC組的1.64倍，而NIC+中糖組、NIC+高糖組培養(yǎng)液中胰島素的濃度則明顯下降(P<0.01)，分別比NIC組下降26.1﹪和61.1﹪；18d時(shí)NIC+低糖組培養(yǎng)液中胰島素的濃度仍明顯升高(P<0.05)，是NIC組的1.2倍；而NIC+中糖組、NIC+高糖組培養(yǎng)液中胰島素的濃度則繼續(xù)下降(P<0.01，P<0.05)，分別比NIC組下降19.3﹪和54.8﹪。對(duì)NIC組來(lái)

6、說(shuō)：與4d相比，11d時(shí)培養(yǎng)液中胰島素的濃度明顯升高(P<0.01)，是4d時(shí)的2.63倍；與11d相比，18d時(shí)培養(yǎng)液中胰島素的濃度明顯下降(P<0.01)，比11d時(shí)下降25.6﹪。對(duì)NIC+低糖組、NIC+中糖組及NIC+高糖組來(lái)說(shuō)：與4d相比，11d和18d時(shí)培養(yǎng)液中胰島素的濃度均呈現(xiàn)趨勢(shì)性的降低(P<0.01，P<0.05)。 5．NIC各組胰島素基因均有表達(dá)，表達(dá)量及趨勢(shì)與放射免疫分析法測(cè)定結(jié)果一致。 結(jié)論:尼克酰胺