丹參酮在病毒性心肌炎中的作用及其對(duì)JAK2-STAT1信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：探討丹參酮(tanshinone)在小鼠柯薩奇病毒B3(Coxsackie viruses B3，CVB3)心肌炎中的作用及其對(duì)JAK2/STAT1信號(hào)通路的影響。
　　方法：取4周齡Balb/c雄性小鼠85只，隨機(jī)分組為如下4組：正常對(duì)照組(N組)、心肌炎對(duì)照組(C組)、JAK2抑制劑組(A組)和丹參酮ⅡA組(T組)，N組10只，C組、A組、T組各25只。N組各小鼠第0天予腹腔注射不含病毒的無(wú)菌病毒維持液0.5mL，C組、

2、T組及A組各小鼠予腹腔注射0.5mL1:100稀釋的病毒液(含50μ L10-9.51 TCID50/ml CVB3的病毒維持液)，制作心肌炎模型后從第1天起做如下干預(yù)處理：A組每天按10mg/Kg劑量予腹腔注射AG490，T組每天按15mg/Kg劑量予腹腔注射丹參酮ⅡA磺酸鈉，N組和C組每天腹腔注射等量無(wú)菌PBS。于實(shí)驗(yàn)第10天各組隨機(jī)取10只小鼠處死，留取心臟標(biāo)本，一部分予4％多聚甲醛固定，一部分迅速放入液氮中凍存?zhèn)溆谩２捎肦eed

3、-Muench法測(cè)定病毒滴度；Log-rank檢驗(yàn)各組生存率比較；光鏡觀察心肌組織病理學(xué)改變并采用Rezkalla法計(jì)算心肌炎癥積分：免疫組化法(immunohistochemistry，IHC)檢測(cè)心肌磷酸化STAT1(phospho-STAT1，p-STAT1)蛋白表達(dá)；應(yīng)用Image-pro plus6.0圖像分析軟件測(cè)定陽(yáng)性表達(dá)部位的平均光密度(mean optical density，MOD)來(lái)測(cè)定心肌p-STAT1蛋白相對(duì)表

4、達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.小鼠一般情況和生存率比較：未接種病毒小鼠活動(dòng)能力強(qiáng)，體重逐日增加，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束無(wú)一死亡；而接種CVB3小鼠出現(xiàn)倦怠、蜷縮、毛發(fā)粗糙、無(wú)光澤，體重進(jìn)行性下降，死亡。接種病毒第5天起C組、A組及T組小鼠開(kāi)始出現(xiàn)死亡，至第10天C組、A組、T組分別死亡9只、13只、5只，Log-rank檢測(cè)C組、A組、T組之間生存率無(wú)顯著性差異(P>0.05)。2.心肌病理改變：N組小鼠心肌細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和心肌

5、細(xì)胞死亡；感染CVB3的各組小鼠心肌組織內(nèi)均出現(xiàn)不同程度的心肌細(xì)胞壞死，血管充血，心肌間質(zhì)內(nèi)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，以淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞為主。A組較C組心肌細(xì)胞壞死及炎癥浸潤(rùn)更為顯著，而T組炎癥反應(yīng)較輕，壞死區(qū)域較小。3.心肌炎癥病理積分比較：與N組正常小鼠比，各心肌炎組炎癥積分均明顯升高。比較A組、C組、T組，心肌病理炎癥積分A組(3.35±0.57)顯著高于C組(2.12±0.39)(P<0.01)，而T組(1.4±0.34)顯著低于C組

6、(P<0.01)。4.免疫組化檢測(cè)心肌p-STAT1蛋白：N組小鼠心肌僅胞漿內(nèi)少量p-STAT1陽(yáng)性表達(dá)；C組心肌p-STAT1陽(yáng)性表達(dá)增加，平均光密度值(MOD=0.2456)較N組(MOD=0.0477)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；A組心肌p-STAT1表達(dá)微弱，平均光密度值(MOD=0.0169)與N組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但較C組明顯下降(P<0.01)；而T組心肌細(xì)胞p-STAT1呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，平均光密

7、度值(MOD=0.4444)較C組、A組均明顯增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。5.相關(guān)性分析：C組、A組、T組小鼠心肌p-STAT1免疫組化平均光密度值與心肌病理炎癥積分之間存在負(fù)相關(guān)(y=-4.363 X+3.318，R2=0.854，P<0.01)。
　　結(jié)論：1.柯薩奇病毒B3誘導(dǎo)的小鼠病毒性心肌炎中存在JAK2/STAT1信號(hào)通路表達(dá)，推測(cè)其參與了病毒性心肌炎的發(fā)病，對(duì)心肌起保護(hù)作用。2.丹參酮可上調(diào)JAK2/ST