miR-21在病毒性心肌炎發(fā)病中的作用及其機制.pdf

1、病毒性心肌炎(viral myocarditis，VMC)是一臨床常見心血管系統(tǒng)疾病。近年來在我國和歐美各國急性病毒性心肌炎的發(fā)病率呈上升趨勢，已成為青少年不明原因猝死的主要原因之一。病毒感染是病毒性心肌炎的重要病因之一，其中腸道病毒尤其是B3型柯薩奇病毒(Coxsackievirus group B type 3，CVB3)感染引起的病毒性心肌炎占發(fā)病人數(shù)的一半以上。迄今，病毒性心肌炎發(fā)病機制還不完全清楚。
　　 微小RNA是

2、近年發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性非編碼RNA小分子，主要在轉錄后水平調(diào)控基因表達，參與包括發(fā)育、腫瘤生成、病毒性疾病、免疫性疾病在內(nèi)的多種生理及病理過程。為了探討miR-21在病毒性心肌炎發(fā)病中的作用及其機制，我們通過建立CVB3誘導的BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型，設計莖環(huán)結構(stem-loop)的miRNA特異性的逆轉錄引物，進行實時定量Real-time PCR，檢測了CVB3誘導的病毒性心肌炎心臟組織中16種miRNAs的表達。在此基礎上，

3、我們對感興趣的miRNA-21，進一步細致研究了病毒感染劑量和感染時間對其表達水平的影響;通過上調(diào)心肌組織中miRNA-21的表達量，運用FACS、免疫熒光、免疫組化、Real-time PCR等實驗技術檢測相關指標，研究miRNA-21在VMC發(fā)病中的作用及其機制。
　　 本研究中我們首先探討，CVB3誘導的病毒性心肌炎中miRNAs表達譜變化。在16種miRNAs中，CVB3感染組心肌組織中的miR-29b、miR-92a、

4、miR-126-5p、miR-126-3p、miR-499a、miR-210和miR-208b表達上調(diào)，分別是對照組的9.79、411.52、196.07、1359.50、20.89、47.56和1140.32倍(P＜0.0001)，有顯著性差異。miR-21、miR-133a、miR-199a和miR-320表達低于對照組，分別下降了4.55、19.43、1.67和9.69倍(P＜0.001)。而其中的另外5個miRNAs，miR-1

5、-1、miR-15b、miR-26a、miR-27a和miR-122均未檢測到表達.隨后，研究miR-21在病毒性心肌炎中的作用。發(fā)現(xiàn)miR-21的表達水平在CVB3感染后1、3和5天逐漸升高，第7天顯著下降。并且心臟組織中miR-21的表達與體重變化率(r2=0.3394，P＜0.05)呈現(xiàn)正相關，血清肌酸激酶(CK)水平(r2=0.4176，P＜0.01)和心肌病理評分(r2=0.6075，P＜0.001)呈現(xiàn)負相關;在心肌組織中過

6、表達miR-21，CVB3感染后的一系列體征變化包括體重變化率、CK、心肌病理評分和生存率，與CVB3組和pMDH+CVB3對照組比較顯著改善，但是病毒載量顯著上升。CVB3感染通過誘導心肌細胞的凋亡，是其發(fā)病機制之一。病毒誘導的心肌凋亡在感染后第7天顯著上升，過表達miR-21顯著降低病毒性心肌炎心肌細胞的凋亡，并且通過下調(diào)其靶基因程序性死亡因子(PDCD4)的表達實現(xiàn)其抑制凋亡功能。
　　 綜上所述，本研究首次發(fā)現(xiàn)miRNA