卡維地洛對病毒性心肌炎小鼠p38MAPK、ERK1-2信號通路的影響.pdf

1、目的：觀察p38絲裂原活化的蛋白激酶(p38mitogen-activatedproteinkinase，p38MAPK)、細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellularsignalregulatedkinase1/2，ERK1/2)信號通路在病毒性心肌炎(viralmyocarditis，VMC)小鼠中的動態(tài)變化及卡維地洛干預后的變化情況，并探討卡維地洛可能的作用機制。 方法：選用188只清潔級近交系4-6周齡雄性Balb/C

2、小鼠，隨機分成4組，正常對照組(B組)8只，心肌炎對照組(C組)60只，卡維地洛干預組(K組)60只，美托洛爾干預組(M組)60只，C組、K組和M組小鼠腹腔接種0.1ml10-5.53·TCID50/ml的柯薩奇病毒B3(coxsackievirusesB3，CVB3)復制心肌炎模型；B組小鼠腹腔注射不含病毒的1640培養(yǎng)液0.1ml；定病毒接種日為第0天。K組、M組和C組小鼠于病毒接種后0.5h分別予卡維地洛(5mg/kg/12h)、

3、美托洛爾(15mg/kg/12h)、生理鹽水0.1ml灌胃，共14天；卡維地洛、美托洛爾在這兩種藥物劑量下具有等效的β，腎上腺素能受體阻滯作用。病毒接種后第1、3、7、14天C組、K組和M組各隨機抽取8只小鼠，B組第14天取全部，留取血清及心臟標本。免疫組化、蛋白免疫印跡(Western-Bolt)法檢測心肌組織中磷酸化p38MAPK、ERK1/2含量；光鏡觀察心肌組織病理學改變，Rezkalla法計算炎癥積分；化學發(fā)光免疫法檢測血清心

4、肌肌鈣蛋白I(cardiactroponinI，cTn-I)水平；ELISA法檢測血清白介素-1β(Interleukin-1β)含量。 結(jié)果： 1.心肌病理改變及炎癥積分：B組未見炎癥浸潤。各心肌炎組小鼠感染CVB3后第1天心肌組織未見炎癥浸潤；第3天心肌內(nèi)及小血管周圍開始出現(xiàn)少量炎癥細胞浸潤，炎癥積分也開始升高，K組最低(與C組比P＜0.05)；第7天，心肌纖維壞死崩解，周圍有大量炎癥細胞浸潤，達炎癥高峰，炎癥積分也

5、達峰值，K組低于C組和M組(P均＜0.05)，各心肌炎組組間有統(tǒng)計學差異(P＜0.05或P＜0.05)：第14天仍有炎癥浸潤，但較前減輕，K組炎癥積分下降最明顯(與C組比P＜0.05)。 2.小鼠死亡數(shù)量的變化：病毒接種后第4天小鼠開始死亡，C組、M組、K組死亡高峰分別在第8、9、10天，整個病程中各組死亡數(shù)分別為21只、19只和16只。B組小鼠無死亡。 3.血清cTn-I變化：病毒接種后第3天各心肌炎組小鼠血清cTn-

6、I開始升高，K組低于C組和M組(P均＜0.01)：第7天達高峰，K組峰值最低，各心肌炎組組間差異有統(tǒng)計學意義(P均＜0.01)；第14天血清cTn-I水平較前明顯降低，K組下降最顯著(與C組比P＜0.05)。 4.血清IL-1β含量變化：B組小鼠IL-1β含量很低，甚至測不出。病毒接種后第1天各心肌炎組小鼠血清IL-1β含量開始升高，但K組低于C組(P＜0.05)；第3天、第7天升高至高峰平臺期，K組峰值最低，各心肌炎組組間有統(tǒng)

7、計學差異(P＜0.05或P＜0.01)；第14天IL-1β含量下降但仍高于B組水平(P＜0.01)，K組降低最明顯(與C組比P＜0.05)。 5.磷酸化p38MAPKWestern-Blot結(jié)果：CVB3感染后第1天，各心肌炎組小鼠磷酸化p38MAPK含量開始升高，但K組低于C組和M組(P均＜0.05)；第3天達峰值，K組峰值最低，各心肌炎組組間有統(tǒng)計學差異(P均＜0.05)；第7天，C組磷酸化p38MAPK含量略高于B組水平(

8、P＜0.01)，于第14天恢復至B組水平；K組、M組磷酸化p38MAPK含量于第7天恢復至B組水平。 6.磷酸化p38MAPK免疫組化結(jié)果：B組小鼠心肌細胞磷酸化p38MAPK表達呈弱陽性，各心肌炎組接種CVB3后第1天即出現(xiàn)磷酸化p38MAPK增加伴核轉(zhuǎn)位，但各心肌炎組組間無統(tǒng)計學差異；第3天達高峰，K組表達低于C組(P＜0.05)；第7天均恢復至B組水平。 7.磷酸化ERK1/2Western-Blot結(jié)果：病毒性心

9、肌炎ERK1/2信號通路呈雙相激活。小鼠在病毒接種后第1天心肌磷酸化ERK1/2含量增加，K組增加不明顯(與C組和M組比P＜0.01，P＜0.05)；第3天達高峰，K組峰值最低，各心肌炎組組間有統(tǒng)計學差異(P均＜0.01)；第7天各心肌炎組磷酸化ERK1/2含量均降至B組水平；第14天表達復增加，K組低于C組和M組(P均＜0.01)。 8.磷酸化ERK1/2免疫組化結(jié)果：B組心肌細胞磷酸化ERK1/2表達呈弱陽性。各心肌炎組小鼠

10、在病毒接種后第1天ERK1/2明顯磷酸化伴核轉(zhuǎn)位，K組表達量最少，各心肌炎組組間有統(tǒng)計學差異(P＜0.05或P＜0.01)；第3天達高峰，K組峰值最低，各心肌炎組組間也有統(tǒng)計學差異(P＜0.01或P＜0.05)；第7天均降至B組水平；第14天表達復增強，K組低于C組和M組(P＜0.05，P＜0.01)。 9.相關(guān)分析結(jié)果：心肌組織磷酸化p38MAPK和磷酸化ERK1/2存在正相關(guān)(western-blot結(jié)果)(r=0.439，

11、p＜0.01，n=39)；心肌組織磷酸化p38MAPK(western-blot結(jié)果)和血清cTn-I間存在正相關(guān)(r=0.469，p＜0.01，n=39)；心肌組織磷酸化p38MAPK(western-blot結(jié)果)和血清IL-1β間存在正相關(guān)(r=0.658，p＜0.01，n=39)；心肌組織磷酸化ERK1/2(western-blot結(jié)果)和血清IL-1β間存在正相關(guān)(r=0.332，p=0.039，n=39)。 結(jié)論：