HBV編碼蛋白調節(jié)炎性體激活途徑的實驗研究.pdf

1、慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界上一個重要的健康難題，世界衛(wèi)生組織(WHO)的數(shù)據(jù)顯示，全世界有超過3億人的慢性HBV感染者，值得注意的是，慢性HBV感染可引起肝硬化和肝細胞癌(HCC)。目前有關慢性HBV感染的發(fā)生機制尚不清楚，推測與病毒的變異、病毒載量以及機體免疫狀態(tài)密切相關。機體的抗病毒免疫應答包括固有免疫和適應性免疫，近年來固有免疫的研究取得了很大的進展，最近研究發(fā)現(xiàn)以固有免疫受體如NLR為主的炎性體在抗病毒感染及其炎癥反應

2、中起著重要的作用，炎性體是由NLR、ASC和半胱天冬氨酸酶組成的大分子復合物，炎性體能夠激活半胱天冬氨酸酶，活化的半胱天冬氨酸酶能夠酶切IL-1β和IL-18前體分子而生成具有生物學活性的IL-1β和IL-18，參與炎癥反應等生物學效應。
　　 近年來有關炎性體在疾病中作用的研究取得很大進展，研究表明炎性體與慢性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病密切相關，與肝臟缺血再灌注、肝纖維化、酒精性肝病、病毒性肝炎等肝臟疾病發(fā)生相關，

3、如最近的研究表明，HCV在感染人類肝臟細胞后通過活化炎性體NLRP3復合物促進炎癥因子IL-18的成熟和分泌，HCV感染外周血單個細胞(PBMC)后也可以上調IL-18的產生，可能與肝損傷有關。乙型肝炎病毒(HBV)能促進患者體內IL-1β上調，所引起的慢性肝臟疾病也與IL-1β有密切關系，但還不清楚其分子機制。
　　 為研究HBV與固有免疫應答尤其是炎性體的活化途徑的相互作用及其分子機制，本研究通過觀察HBV編碼蛋白HBcAg

4、和HBxAg對人急性單核細胞白血病細胞株THP-1細胞的炎性體活化途徑的調節(jié)作用及其分子機制，研究HBV與炎性體的相互作用，為闡明HBV慢性化的機制奠定一定理論基礎，為慢性HBV的防治提供新的策略。
　　 方法:將編碼HBcAg和HBxAg基因的真核表達質粒轉染THP-1細胞，用LPS和Poly(dA-dT)等刺激THP-1細胞，采用熒光定量PCR技術檢測炎性體相關分子，如NLRP1、NLRP3、AIM2、IFI16、NLRC4

5、、caspase-1、ASC和IL-1β在mRNA水平的表達情況，同時以ELISA技術和蛋白印跡技術檢測相關蛋白的表達和分泌，并采用RNA干擾技術研究HBcAg的分子調節(jié)機制。
　　 結果表明:1:HBcAg促進Poly(dA-dT)刺激的炎性體活化途徑，而對ATP/Nigericin刺激的炎性體活化途徑?jīng)]有影響，同時HBcAg促進炎性體相關分子的表達，其中對AIM2 mRNA表達促進作用比較明顯。使用RNA干擾抑制AIM2表達