2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩46頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:針對(duì)單純皰疹病毒Ⅱ型(Herpes simplex virus type2, HSV-2)的UL29基因,構(gòu)建了4組短發(fā)夾RNA(Small hairpin RNA, shRNA)表達(dá)質(zhì)粒—pGPU6/GFP/Neo/shRNA UL29,并對(duì) UL29shRNA表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行了篩選。通過將篩選的 UL29shRNA表達(dá)質(zhì)粒與抗病毒藥物阿昔洛韋(Aciclovir, ACV)的抗病毒效果及細(xì)胞毒性進(jìn)行比較,探討RNA干擾在細(xì)胞水平上

2、對(duì)HSV-2病毒的抑制效果。
  方法:根據(jù)shRNA的一般設(shè)計(jì)原則,針對(duì)HSV-2的UL29基因設(shè)計(jì)出四組表達(dá)質(zhì)粒,通過病變抑制率、mRNA相對(duì)表達(dá)量從中篩選出一組干擾效果最好的表達(dá)質(zhì)?!猆L29-shRNA1641。以pGPU6/GFP/Neo/UL29-shRNA1641作為RNA干擾組與抗病毒藥ACV進(jìn)行對(duì)HSV-2的抑制效果的比較研究。預(yù)實(shí)驗(yàn)中通過CCK-8(Cell Counting Kit-8)法測(cè)定ACV的最大無毒

3、濃度(maximal atoxic concentration, TC0)和ACV的半數(shù)有效濃度(Half effective concentration, EC50),分別用于病毒抑制效果的實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞毒性的實(shí)驗(yàn)。UL29-shRNA1641與ACV抑制HSV-2的實(shí)驗(yàn)分為3個(gè)實(shí)驗(yàn)組:RNAi組、ACV組和RNAi+ACV組。采用CCK-8法檢測(cè)病變抑制率,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time fluorescent quantita

4、tive PCR, RT-PCR)檢測(cè)UL29mRNA的相對(duì)表達(dá)量, Karber法檢測(cè)細(xì)胞上清液中病毒滴度的變化、蛋白印跡法(Western blot)檢測(cè)ICP8的相對(duì)表達(dá)量,對(duì) RNAi與 ACV抑制效果進(jìn)行比較;通過 WST-1(Water-Soluble Tetrazolium-1)法和臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)法對(duì)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染復(fù)合物(質(zhì)粒+轉(zhuǎn)染試劑)和ACV的細(xì)胞毒性進(jìn)行比較。
  結(jié)果:(1)通過病變抑制率、mRNA相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)表

5、明,4組UL29shRNA表達(dá)質(zhì)粒對(duì)HSV-2均有一定的抑制效果,以其中UL29-shRNA1461對(duì)基因表達(dá)抑制率最高,為最佳干擾組。(2)預(yù)實(shí)驗(yàn)中 Karber法測(cè)定擴(kuò)增后的病毒滴度為 TCID50=10-5.375/100μl,CCK-8法測(cè)定ACV的TC0和EC50分別為5.0μg/ml和31.7μg/ml。(3)CCK-8法檢測(cè)病變抑制率的結(jié)果顯示,RNAi組、ACV組和RNAi+ACV組細(xì)胞病變抑制率分別為35.35±0.9

6、8%、43.95±1.31%和85.82±1.13%,其中RNAi組比ACV組病變抑制率低(P﹤0.05),RNAi+ACV組的病變抑制率明顯高于RNAi組和ACV組(P﹤0.05)。(4)RT-PCR檢測(cè)三組mRNA的相對(duì)表達(dá)水平,RNAi組、ACV組和RNAi+ACV組均能不同程度降低mRNA相對(duì)表達(dá)量。RNAi組UL29基因相對(duì)表達(dá)量高于ACV組(P﹤0.05);RNAi+ACV組UL29基因相對(duì)表達(dá)量明顯低于RNAi組和ACV組

7、(P﹤0.05)。(5)Karber法檢測(cè)三組細(xì)胞上清液病毒滴度表明,陰性對(duì)照組的上清病毒滴度為10-5.4±0.3/100μl,RNAi組、ACV組和RNAi+ACV組上清液病毒滴度分別為10-4.0±0.2/100μl、10-3.7±0.2/100μl和10-2.9±0.3/100μl,三組與陰性對(duì)照相比均有顯著性差異(P﹤0.05),RNAi組病毒滴度高于ACV組(P﹤0.05),RNAi+ACV組的病變病毒滴度明顯低于RNAi組

8、和ACV組(P﹤0.05)。(6)Western blot檢測(cè)ICP8相對(duì)表達(dá)量, RNAi組、ACV組和 RNAi+ACV組均能不同程度降低 ICP8表達(dá),ACV組的 ICP8相對(duì)表達(dá)量比RNAi組低(P﹤0.05)。RNAi+ACV組ICP8相對(duì)表達(dá)量降低最為明顯,與ACV組和RNAi組相比有顯著差異(P﹤0.05)。(7)WST-1法對(duì)轉(zhuǎn)染復(fù)合物與ACV的細(xì)胞毒性進(jìn)行比較, RNAi組和 ACV組細(xì)胞死亡率分別為23.65±1.3

9、3%和39.48±1.25%;臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)法對(duì)轉(zhuǎn)染復(fù)合物和 ACV的細(xì)胞毒性進(jìn)行比較,RNAi組和ACV組細(xì)胞死亡率分別為18.55±1.98%和42.22±3.23%。RNAi組與ACV組相比均有顯著性差異(P﹤0.05)。說明RNAi中質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑對(duì)細(xì)胞的毒性明顯小于ACV。
  結(jié)論:設(shè)計(jì)的4組UL29shRNA表達(dá)質(zhì)粒均能抑制UL29基因和ICP8的表達(dá)。其中UL29-shRN1461干擾果最好。以UL29-shRN1

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論